PDF《RIDASCREEN? Zearalenon》

1 x

96 孔微孔板(12 条每条

8 孔) 包被有针对玉米赤霉烯酮的抗体

6 x 标准品(每瓶 1.3 ml)

0 ppt (零标准品),50 ppt,150 ppt,450 ppt,1350 ppt,4050 ppt 玉米赤霉烯酮水溶液

1 x 酶连接物(0.7 ml)红色瓶盖 过氧化物酶标记的玉米赤霉烯酮 浓缩液

1 x 底物(7 ml)绿色瓶盖 含有过氧化脲

1 x 发色剂(7 ml)蓝色瓶盖 含有四甲基对二氨基联苯

1 x 反应终止液(14 ml)黄色瓶盖 RIDASCREEN? Zearalenon 12-09-07

5 含1N的硫酸

1 x 缓冲液 1(50 ml)白色瓶盖 样品和酶连接物稀释缓冲液 5. 另需的试剂和设备 5.1. 设备: ?微孔板酶标仪(450 nm) ?实验用粉碎机和或粮食碾磨机 ?振荡器 ?用于样品处理:漏斗和玻璃长颈瓶(100 ml) ?滤纸:Whatman No.

1 或者类似 ?离心机 ?旋转蒸发器或者其他蒸发设备 ?巴氏吸液管 ?刻度移液管 ?20 ?l -

200 ?l 和200 -

1000 ?l 微量移液管 5.2. 试剂 ?甲醇 其他用于处理血清或尿液的必要试剂: ?Glucuronidase/Arylsulfatase aus Helix pomatia (Merck, Art. Nr.: 4114) 来源于罗 曼蜗牛的葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶(Merck 公司,订货号:4114) ?RIDA? C18 column(订货号:R2002) ?50 mM 乙酸钠缓冲液,pH 4.8 ?20 mM Tris 缓冲液,pH 8.5 / 甲醇(80/20) 6. 操作者应该注意之事项 建议由经过相关培训的实验人员进行本试剂盒的使用操作.请严格按照说明书的要 求使用本试剂盒. 标准品中含有玉米赤霉烯酮,应特别小心.避免皮肤接触(使用手套). 玻璃器具和有毒溶液用次氯酸钠溶液(10 % (v/v))浸泡消毒过夜(用HCl 调节 溶液 PH 值为 7) . 反应终止液为

1 N 硫酸(R36/38, S2-26).

6 RIDASCREEN? Zearalenon 12-09-07 7. 储存条件 保存试剂盒于

2 -

8 °C,不要冷冻. 将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于

2 -

8 °C 条件下. 玉米赤霉烯酮对光敏感,因此标准品要避免直接暴露在光线下. 无色底物/发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下. 对过了有效期(见试剂盒标签)的试剂盒不再提供任何质量保证. 不能交叉使用不同批号的盒中试剂. 8. 试剂变质的迹象 ?底物/发色剂在使用前发现颜色变蓝 ?零标准品的吸光度值小于 0.6 (A450 nm <

0.6) 9. 样品处理 样品应当避光冷藏保存. 9.1. 谷物和饲料样品 对采集的代表性样品用实验用粉碎机粉碎并充分混合 ?称取

5 g 粉碎后的样品,加入

25 ml 甲醇/水(70/30)溶液* ?用力振荡

3 min(手动或借助振荡器) ?提取物离心:10 min /

3500 g /室温(20 -

25 °C)或者使用 Whatman No.

1 滤 纸过滤 ?上清液或者滤液用样品稀释缓冲液(缓冲液 1)按照 1:7 (1 + 6) 的比例稀释(例如:100 ?l 上清液或滤液 +

600 ?l 缓冲液 1)**) ?每孔取

50 ?l 稀释后的上清液或稀释后滤液进行检测 *) 样品的用量可以适当的增大,但是甲醇/水溶液的用量也应同比例增加,比如

10 g 样品中加入

50 ml

70 % 甲醇/水溶液(70/30) **)小麦样品可能会在缓冲液稀释后出现混浊情况,从而导致回收率降低.为此, 我们建议,在缓冲液稀释后进行高速离心(3 分钟/

20000 g / 室温(20 C

25 °C)),取50 ?l 离心后的上清液进行检测. RIDASCREEN? Zearalenon 12-09-07

7 备注: 此甲醇提取物(上清液或滤液)可以在冰箱中(2 -

8 °C)保存

2 星期,可以在冰 柜中(-20 °C)保存

2 个月.应保存于棕色玻璃瓶中并储存于暗处. 如果玉米赤霉烯酮的浓度预计较高,必须用样品稀释缓冲液(缓冲液 1)继续稀 释. 9.2. 啤酒样品 ?去除足量啤酒样品中的气体(继续减少碳酸的含量,直到肉眼不能看见气泡为 止,例如通过搅拌或者过滤) ?去除气体的啤酒样品用样品稀释缓冲液(缓冲液 1)稀释,稀释比例为 1:5(1 + 4)(例如:100 ?l 样品 +