PDF《RIDASCREEN? Zearalenon》

400 ?l 缓冲液 1) ?每孔

50 ?l 进行检测 备注: 对于有浑浊的啤酒样品(例如酵母小麦啤酒),在去除气体后必须对样品进行无菌 过滤,然后再进行检测! 9.3.血清和尿液 仅针对尿液的处理: ?取0.5 ml 尿液样品用

50 mM 乙酸钠缓冲液,pH 4.8 稀释 ?加入

8 ?l 罗曼蜗牛葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶 ?在37 °C 条件下孵育

3 小时 使用 RIDA? C18 column (订货号:R2002)对3.5 ml 水解尿或 0.5 ml 血清(未 处理)按照如下步骤纯化: ?滴速为

1 滴/秒 ?使用

3 ml 甲醇(100 %)洗涤层析柱 ?使用

2 ml

20 mM Tris 缓冲液,pH 8.5 / 甲醇(80/20)平衡层析柱 ?3.5 ml 水解尿或者 0.5 ml 血清上柱 ?使用

2 ml

20 mM Tris 缓冲液,pH 8.5 / 甲醇(80/20)洗脱 ?使用

3 ml 甲醇溶液(40 %)洗脱 ?压入或吸出空气对层析柱进行干燥(1 分钟) ?使用

1 ml 甲醇溶液(80 %)缓慢洗脱样品(15 滴每分钟) ?蒸发洗脱液,最高温度

60 °C(尽量在通风厨中弱氮气流条件下) ?干燥残留物溶解于

50 ?l 甲醇中,加入样品稀释缓冲液

450 ?l(缓冲液 1)并充 分混合

8 RIDASCREEN? Zearalenon 12-09-07 ?每孔

50 ?l 进行检测 备注: 可根据需求提供肉类和奶类样品的处理方法. 10. 检测步骤 10.1. 检测前的准备 使用之前将所有试剂回温至室温(20 -

25 °C). 玉米赤霉烯酮酶连接物(红色瓶盖瓶子)为浓缩液.由于稀释的酶连接物的弱稳定 性,所以只稀释实际需用量的酶连接物. 在吸取浓缩液之前,要仔细地轻轻振摇. 用缓冲液 1(白色瓶盖的瓶子)以1:11(1 + 10)的比例稀释酶连接物浓缩液(例如:200 ?l 浓缩液 + 2.0 ml 缓冲液,足够

4 个微孔板条用). 10.2. 检测操作 仔细进行洗板的操作非常重要.在使用中不要让微孔出现干燥. 1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架,均做两个平行实验, 记录下标准品和样品的位置. 2. 将50 ?l 标准品及处理好的样品溶液加到相应的微孔中,均做两个平行实验. 3. 向每一个微孔中加入

50 ?l 稀释后的酶连接物溶液,充分混合后在室温(20 -

25 °C)条件下暗处孵育

2 小时. 4. 倒出孔中的液体,将微孔板架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打

3 次)以保证完 全除去孔中的液体.加入

250 ?l 蒸馏水洗涤微孔.上述操作重复进行两遍. 5. 向每一个微孔中加入

50 ?l 底物和

50 ?l 发色剂,充分混合后在室温(20 -

25 °C)条件下暗处孵育

30 分钟. 6. 向每一个微孔中加入

100 ?l 反应终止液,充分混合.在加入反应终止液后

30 分钟内于

450 nm 处测量吸光度值. 11. 结果评估 请使用 R-Biopharm 德国拜发公司专门为 RIDASCREEN? 系列产品设计的应用软件 RIDA? SOFT Win(订货号:Z9999)来进行结果分析. 对单次检测建议使用Logit/log 曲线进行结果分析,对两次或多次平行检测应该使用 Cubic Spline 曲线进行结果分析. 关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书. RIDASCREEN? Zearalenon 12-09-07

9 以下是没有使用软件的计算方法: 标准品的吸光度值(或样品) x

100 = % 吸光度比值 零标准品的吸光度值 吸光度值以百分比表示,因此零标准品等同于

100 %.计算标准品相应的比值,并 绘成一个与玉米赤霉烯酮浓度(ng/kg)相关的半对数坐标系统的曲线图.根据每 个样品对应的吸光度值,从校正曲线中读出样品中玉米赤霉烯酮的浓度(ng/kg). 为了获得样品中玉米赤霉烯酮的实际浓度 ng/kg,从校正曲线上读出的浓度值必须 乘以相对应的样品稀释倍数.按照说明书中给出的方法进行操作,样品稀释倍数 为: 谷物和饲料样品