PDF《广州中医药大学学报》

4 j 分为 5级 :工级为 口角和面部抽动;

1 1 级为 工级 + 点头 ;

I I I 级为 Ⅱ级 +前肢阵挛 ;

1 V 级为Ⅲ级 +后腿 站立 ;

V级为Ⅳ级 +跌倒.以大 鼠出现Ⅳ 一V级发 作 ,且持续

2 0m i n以上为合乎标准. ②皮质脑电图改变 :大鼠皮质脑电图出现痫性 放电.1.3治疗方法 苯妥英钠组在致痫时给药 ;

常规 针刺组在造模前

5 d和致痫 时均予 以治疗 ,每天

1 次 ;

穴位埋药线组在造模前

3 d埋线.①穴位埋药 线组 :选取大 鼠穴位方法参照 《 实验针灸学》 ,取 大椎 、心俞透膈俞 ( 双) .用长约

5 c m的00号医 用羊肠线浸泡于安定液 ( 含量

5 g / L )2

4 h后备用 ;

操作方法:穴位处剪毛,用龙胆紫作出标记 ,皮肤 常规消毒 ,在标记 中用

2 0 L利 多卡因皮 内麻醉 , 镊取一段约

0 .

5 c m长 的药线 ,放置在 6号注射针 头的前端,后接针芯 (

2 8号1.5寸长 的毫 针剪去 针尖 ) ,左手拇 、食指绷 紧或捏起 进针部位皮肤 , 右手持针,刺人到所需深度后 ,边推针芯 ,边退针 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 2期 陈文华 ,等 .穴位埋药线对癫痫持续状态后神经细胞凋亡的抑制作用

1 1

9 管 ,将药线埋植在穴位的皮下组织或肌层 内,针孔 处用消毒棉 签按压片刻.② 常规针刺组 :选大椎 、 心俞透膈俞 ( 双),用美容针 ,留针

3 0 m i n ,期间加以平补平泻手法 ,每天

1 次.③苯妥英钠组 :致 痫后即予腹腔注射

0 .

2 5 m g / k g 苯妥英钠.

1 .

4 指标检测 所有动物均在模型组致痫

2 4 h 后 麻醉 ,经4oL多聚 甲醛心脏灌 注 固定 ,断头取 脑 ,标本常规脱水 、浸蜡 、包埋后 ,冠状连续石蜡 切片(片厚4m,以镜下所见相同海 马切 面形 态为统一切 片 深度 标准 ) .

1 .

4 .

1 原位细胞 凋 亡检 测法(AP法 ) 检测 穴位埋药线对 s E后大 鼠海马神经 元DNA片段化 的影 响:预加热 切片至

6 0 ℃,常规二 甲苯脱蜡 ,梯度 乙醇入水 ;

室 温下

0 .

0 1 m o l / L( p H

6 .

0 )柠 檬酸钠 T r i t o n X .

1 0

0 孵育8min,P B S 漂洗2次;

加

5 0 标 记混合 物,4

1 ℃水浴 箱孵 育1h,P B S漂洗 2次;

加50转换液

4 1 ℃水浴箱孵育

3 0 m i n ,P B S漂洗

3 次;

加505.溴.

4 . 氯.

3 . 吲哚磷 酸二 钠盐 ( B C I P ) 显色液显色

1 0 m i n ,P B S漂洗 3次;

封片后 观察结 果;

用 已知 阳性 片作为 阳性 对照 ,用PBS替代一 抗作阴性对照 ,细胞核 中有紫或深蓝色颗粒者为阳 性染色细胞.每张切片计数 3个不同视野 (

4 0

0 X) 内的 阳性 细胞 数 ,取 平均 数作为细胞 凋亡指数 ( a p o p t o t i c i n d e x ,A I ) .

1 .

4 .

2 免疫 组化 法 检测穴 位埋 药线对sE后 大鼠海马 c . j u n 、b c

1 . 2蛋 白表达 的影响 :常规二甲苯脱 蜡,梯度乙醇 入水,流水 冲洗

2 m i n ;

0 .

0 1 m o l / L ( p H

6 .

0 )柠檬 酸盐缓 冲液加 热(95℃)抗 原修 复10min,自然 冷却 至室 温,P B S漂洗3次 ;

加入

3 0 g / L的H20250阻断内源性过氧化物酶 ,室温 下作用

1 0m i n ;

流水 冲洗

2 r a i n ,用 免疫组化划 圈笔(PAPpen)在组 织周围划 圈,P B S漂洗3次 ;

滴加 封 闭用 正常羊 血 清工作 液(SP.9000)5

0 , 室温 孵育10min,倾 去(勿洗);

滴 加c.jun(1:100)/ b c

1 .

2 (

1 :

1 0

0 )一抗50,微 波炉一档湿盒内微 波处 理2.5min,放 置至7min;