PDF《明专利说明书》

[19]中华人民共和国国家知识产权局 [12]发明专利说明书[11]授权公告号 CN 100347183C [45]授权公告日 2007年11月7日 专利号 ZL 03122564.

0 [22]申请日 94.6.27 [21]申请号 03122564.0 [30]优先权 [32]1993.09.30 [33]JP [31]265416/1993 [32]1994.06.27 [33]CN [31]94107243.6 [73]专利权人 株式会社林原生物化学研究所 地址 日本冈山县 [72]发明人 丸田和彦 久保田伦夫 杉本利行 三宅 俊雄 [56]参考文献 EP0486315A 1992.05.20 WO9203565A 1992.03.05 JP4360692A 1992.12.14 审查员 赵世华 [74]专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专利商标 事务所 代理人 程泳 [51]Int.CI. C07H 3/00 (2006.01) C12P 19/14 (2006.01) C12P 19/16 (2006.01) C12P 19/12 (2006.01) 权利要求书

1 页 说明书

62 页 附图

8 页[54]发明名称 非还原性糖类生成酶及其制备和应用 [57]摘要 公开了一种新的非还原性糖类生成酶及其制备 和应用.这种酶可从Rhizobium sp.M-11(FERMBP41 30)和Arthrobacter sp.Q36(FERMBP-4316)等微生 物的培养物中获取,当其作用于还原性淀粉部分水 解产物时可生成具有海藻糖结构的非还原性糖类. 当葡萄糖淀粉酶和α-葡糖苷酶作用于这种非还原 性糖类时,易于产生海藻糖.这种非还原性糖类和 海藻糖可广泛应用于食品、化妆品和药品中. 03122564.0 权利要求书第1/1页21.一种制备结晶α,α- 海藻糖的方法,包括步骤(a)浓缩含有α,α-海藻糖的水性糖溶液物;

(b)在所得水性浓缩物中不使用任何醇类而结晶α,α-海藻 糖;

和(c)分离并收集结晶的α,α-海藻糖. 2.权利要求1的方法,其中步骤b)中所述水性浓缩物具有 65-90w/w%的固体浓度,且所述α,α-海藻糖在所述水性浓缩 物中的含量为以干固体物计至少65w/w%. 03122564.0 说明书第1/62页3非还原性糖类生成酶及其制备和应用 本发明涉及一种新的非还原性糖类生成酶,以及它的制备和应用 更具体地说,涉及这样一种新的还原性糖类生成酶:当其作用于一种 或多种具有3 个或3 个以上的葡萄糖聚合度的还原性淀粉部分水解产 物时,生成一种具有海藻糖结构的非还原性糖类,还涉及这种酶的制 备,以及能够产生这种酶的微生物.本发明还涉及含有可由这种酶制 备的以海藻糖结构为末端单元的非还原性糖类的组合物,含有上述非 还原性糖类的还原性比较低的糖类,和/或由这种糖类所制备的海藻 糖. 海藻糖或α,α-海藻糖长期以来一直被认为是由葡萄糖单元组 成的非还原性糖类.正如在Advance? in? Carbohydrate? Chemistry, 18卷,第201-225(1963)中(由美国的Academic Press出版)和在Applied? and? Environmental? Microbiology,第56卷,3213-3215页(1990)中所公开的,海藻糖广 泛存在于微生物、蘑菇和昆虫中,但含量较低.由于非还原性糖类包 括不会与具有氨基的物质,如氨基酸和蛋白质反应的海藻糖,所以它 们即不会引起氨基-羰基反应,也不会改变含有氨基酸的物质.因此, 非还原性糖类被认为可以使用而不用担心会引起不理想的褐变和变质 因为上述原因,就迫切需要建立一种制备这种还原糖的方法在海藻糖的传统制备方法中,和在日本专利公开号No.154,485?75中所公开的,采用的微生物,或者如日本专利03122564.0 说明书第2/62页4公开号No.216,695/83中提出的,同时采用麦芽糖酶- 和麦芽糖磷酸化酶将麦芽糖转化成海藻糖.然而,前一种方法不适于 工业规模的制备,因为海藻糖在作为原材料的微生物中的含量以干固 体物计(d.s.b.)低于15w/w%( w/w% 的表达形 式在说明书中可简化为 % ,除非另有说明),且分离和提纯步骤 复杂.而后一种方案具有如下缺点: (i) 因为海藻糖是通过葡萄糖-1- 磷酸生成的,作为底物的麦芽 糖不能以较高的浓度使用;