PDF《中科瑞泰（北京）生物科技有限公司》

注:本制品仅供科研用.

请勿用于人体及动物的医疗、临床诊断或作为食品、化妆品、家庭用品的添加剂等用途. 中科瑞泰(北京)生物科技有限公司

电话:400-699-0631 E-mail:[email protected] http://www.real-times.com.cn 中科瑞泰(北京)生物科技有限公司 Tel: 400-699-0631 Fax: 010-82597807 http:// www.real-tims.com.cn E-mail: [email protected] 限制级凝血酶 Thrombin, Restriction Grade 产品包装: 产品编号 产品名称 产品包装 贮存 RT1040-01 限制级凝血酶

1000 U -20℃ RT1040-02 1*Thrombin Dilution/Storage buffer

2 ml -20℃ RT1040-03 10*Thrombin Cleavage buffer

1 ml -20℃ 说明书 一份 产品简介: 凝血酶(Thrombin)来源于牛血浆,分子量37KD,是由两条肽链(31KD和6KD)通过二硫 键组成的. 凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶,通常能够有效切割质量比为1:2000的蛋 白.凝血酶最佳切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2'(X4 和X3 是疏水氨基酸而X1'和X2'是非 酸性氨基酸),一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N.在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效.在凝血酶切割位点和N末端标签之间 插入五个甘氨酸残基可改善酶切,通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割, 而且也可以避免可能发生的错误切割.凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者 苯甲脒琼脂糖移去. 单位定义:1 U在标准切割缓冲液里20℃ 16小时能切割1mg的目的蛋白. 保存条件: -20℃保存,一年有效. 使用方法:

1 用0.1ml 1*凝血酶稀释/贮存缓冲液(1*Thrombin Dilution/Storage buffer) (50 mM sodium citrate,

200 mM NaCl, 0.1% PEG-8000, 50% glycerol, pH 6.5) 彻底溶解1000 U凝血酶粉末, 得到凝血酶母液,浓度为10U/μl.

2 用1*凝血酶稀释/贮存缓冲液将凝血酶母液按照 1:25,1:50,1:100,1:200 进行梯度稀释,稀释 液含有大约每 μl 0.4U,0.2U,0.1U,0.05U 凝血酶.

3 按照下表配制反应液;

10*Thrombin Cleavage Buffer

5 μl 目的蛋白

10 μg 凝血酶稀释液(含有不同 U 的凝血酶)

1 μl 超纯水 x μl 总体积

50 μl 注:本制品仅供科研用.请勿用于人体及动物的医疗、临床诊断或作为食品、化妆品、家庭用品的添加剂等用途. 中科瑞泰(北京)生物科技有限公司

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4 常温(20-25℃)孵育,2 小时,4 小时,6 小时,8 小时分别取样 10μl 与5*SDS-PAGE 上 样缓冲液混合后电泳检测,确定酶切程度.