PDF《PS W 22 W》

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2 2 P D F ( T r i a l V e r s i o n ) W W W .

C C Y T . N E T 基于壳聚糖膜固定双酶的胆碱传感器的 研究 李春香*1 阳明辉2 沈国励2 俞汝勤2

1 ( 湖南科技大学化学化工学院,湘潭

4 1

1 2

0 1 )

2 ( 湖南大 学化学化工学院, 化学生物传感与计量学国家重点实验室, 长沙410082)摘要提出了一种基 于壳聚糖膜固定辣根过氧化物酶-胆碱氧化酶的胆碱传感器的 制备方法.该传感器 以 电聚合于玻碳电极的硫 堇作为电子传递介体, 在pH6 .

8 , 外加电压 -

0 . 2V ( v s . S C E ) 条件下, 其 峰电流与浓 度 范围

5 . 0*

1 0 -5 ~

3 . 0*

1 0 -3 m o l / L的胆碱呈良好的线性 响应;

检 出限为

1 . 0*

1 0 -5 m o l / L .传感器 有良好 的 选择性和稳定性, 使用 一月后, 仍能保持其初始活性的

8 0 %. 关键词 壳聚糖, 硫堇 , 辣根过氧化物酶, 胆碱氧化酶

2 0

0 4 -

0 3 -

0 1收稿;

2 0

0 4 -

0 6 -

0 9接受 本文 系湖南 省自 然科学 基金 资助项 目( N o .

0 4 J J

3 0

0 4

7 )

1 引言胆碱广泛存在于各种动植物体内, 是动物体内合成磷脂、 卵磷脂的重要成 分, 为乙酰胆碱的前体. 它在调整动物体内脂肪代谢、 防止脂肪肝、 保证体细胞的正常生命活动、 促进软 骨发育以及神经系统的 正常运行等方面都起重要作用.单酶修饰的电流型胆碱生物传感器已有较多的研究 [ 1~6] .该类传感器 具有制备简单、 造价低廉、 使用期较长等优点.本实验以玻碳电极为基底电极, 先于电极表面聚合一层 硫堇薄膜作为电子 传递 媒介, 后 以壳聚糖 膜作为酶 固定基质, 用 戊二醛 交 联固 定辣 根过氧 化物 酶(HRP)和胆碱氧化酶( C H O D ) , 制得双酶电流型胆碱传感器.该传感器灵敏 度高、 线性范围宽、 重现性 较好.

2 实验部分

2 .

1 仪器与试剂 X J P -

8 2

1 ( C ) 型新极谱仪( 江苏电分析仪器厂) ;

Z F -

1 0数据采集存储器( 上 海正方电子电器有限公 司) ;

S B

2 2

0 0型超声仪( 上海 B r a n s o n ) ;

G S P -

7 7 -

0 3磁力搅拌器.三电极系统: 酶修饰电极为工作电极, 饱和甘汞电极为参比电极, 铂电极为对电极. 辣根过氧化物酶 ( H R P ,3

0 0U / m g ,上海丽 珠生 物技术 有限公 司) ;

胆碱氧化酶 ( C H O D ,1

3 .

1 U / m g ,E . C1 .

1 .

3 .

1 7 , A l c a l i g e n e s 公司) ;

溴化胆碱( C H O ,德国 S i g m a公司) ;

壳聚糖( 上海生化试剂公 司) ;

硫堇( 上海化学试剂公司) ;

其他试剂均为分析纯.实验用水为二次蒸馏水.

2 .

2 胆碱氧化酶传感器的制备 将玻碳电极( = 4m m )在金相砂纸上打磨后, 用Al2O

3 悬浊液将电极表 面抛光, 依次于 8m o l / L H N O

3、

0 . 2m o l / LN a O H、 丙酮、 水中各超声清洗 5m i n , 并于红外灯下烘干.以含0.1m m o l / L硫堇的磷 酸盐缓冲液 ( P B S ,p H6 .

5 ) 为聚合液, 将干净电极置于其中, 先于

1 . 5V恒电位条件下氧化硫堇

1 0 m i n ,后于 -

0 .

5 ~1 . 5V之间以扫速

4 0m V/ s 的条件下循环扫描

2 0m i n .取出洗净, 晾干. 准确称取

1 . 0g 壳聚糖溶于

1 0 0m L1 .

0 % 醋酸溶液中, 在室温下连续搅拌直至完全溶解, 得透明的 壳聚糖溶胶.取5μ L壳聚糖溶液滴于硫堇修饰的玻碳电极表面, 并于室温下 自然晾干成膜、 水洗、 晾干.取5μ L0 .