PDF《PS W 22 W》

2 5 % 戊二醛滴于电极表面反应

3 0m i n ,水清洗后, 再于膜表面滴加 5μ LH R P溶液 (

1 5 g / L ) , 静置 1h , 用水洗净, 即制得 H R P酶电极.再取 5μ L壳聚糖溶液滴于 H R P酶电极表面, 晾干后按 相同步骤滴加 5μ L0 .

2 5 % 戊二醛溶液, 水洗后滴加 5μ LC H O D溶液 (

2 5g / L ) , 室温反应 1h . 第33卷

2 0

0 5年 1月 分析化学 ( F E N X I H U A X U E ) 研究报告 C h i n e s eJ o u r n a l o f A n a l y t i c a l C h e m i s t r y 第 1期 9~

1 2 P S

2 2 P D F ( T r i a l V e r s i o n ) W W W . C C Y T . N E T

2 .

3 实验方法 移取一定量的 P B S缓冲溶液, 插入三电极系统, 恒定电压 -

0 . 2V , 通氮除氧, 待系统稳定后, 加入 不同量胆碱标准溶液, 记录其电流变化值.

3 结果与讨论

3 .

1 修饰电极的响应特征 壳聚糖和硫堇的化学结构图如下, 其单体所含的氨基有利于聚合成键. 聚硫堇具有很好的电化学可逆性、 稳定性和快速的电子传递能力[7, 8] , 被用作电极与辣根过氧化物 酶的电子传递媒介 [9 ,

1 0] .壳聚糖不易溶于水, 成膜后具有很好的吸附性、 稳定性和良好的生物相容性, 图10.067m o l / L磷酸缓冲液(pH6.8)中胆碱 生物传感器的循环伏安图 F i g .

1 C y c l i cv o l t a m m o g r a m so f t h ec h i - t o s a nb i o s e n s o r i n

0 .

0 6 7m o l / Lp h o s p h a t e b u f f e r ( p H

6 .

8 ) a .无胆碱溶液(withoutc h o l i n e ) ;

b .含10mmol/L的胆碱溶液(w i t h

1 0 m m o l / L c h o l i n e ) .v :4 0m V/ s . 其丰富的氨基使它被广 泛用于生物分子的固定[1

1 ,

1 2] 和修饰电极 的制备 [1

3 ,

1 4] . 图 1是传感器对胆碱的催化循环伏安图.在无胆碱条件下, 呈现出硫堇的一对氧化 还原峰( 图1a),当加入

1 0m m o l / L胆碱 后, 还原电流迅速增大, 而氧化电流几乎消失( 图1b).这表明胆 碱在胆碱氧化酶的催化 下生成的 H 2O

2 在电极表面被催化还原. 此反应中, 硫堇起到了很好的电子传递作用.反应机理为[1 5] : C H O+

2 O

2 +H

2 C H O D 甜菜碱( b e t a i n e )+

2 H 2O

2 (

1 ) H 2O

2 + H R P r e d H 2O+ H R P o x (

2 ) H R P o x + T H H R P r e d + T H + (

3 ) H R P ? +T H H R P ? +T H * H R P r e d +T H + (

4 ) 反应 1生成的 H 2O

2 被 固定的 H R P还原, 硫堇作为电子媒介在 H R P和电极表面传递电 子, 其中 T H* 为反应过程中形成的自由 基, 能被 H R P ? 氧化, 随后于电极表面还原.

3 .

2 实验条件优化 图2pH值对 胆碱 生物 传感 器响 应的 影响 F i g .

2 E f f e c to fp H o n t h e c h i t o s a n b i o s e n s o r r e s p o n s e 电极表面固定的酶 量影响电极的响应性能.改变辣根过氧 化物酶的浓度, 在5~

1 5g / L范围内, 发现电极对 H 2O

2 的响应随 酶液浓度的增加而增大, 这是因为增大酶液的浓度相应的增大了 电极表面的载酶量.继续增大辣根过氧化物酶的浓度, 响应电流 变化不大, 这可能是由于电极表面的载酶量已达到饱和.本实验 所用辣根过氧化物酶的浓度为

1 5g / L .实验发现, 胆碱氧化酶浓 度为

2 5g / L时电极响应达到最大值, 故实验选用该浓度. 实验考察了工作电 位对电极响应的影响.在0~-3

0 0m V 的范围, 响应电流 随着 电位的负移 而逐渐增 大, 达到 -2

0 0m V 时, 响应值开始趋于平稳.由于低电位下基线电流较低, 且能有 效减 少样品溶 液中电活 性物质带 来的干扰 [