PDF《Karroten》

1 Karroten version 18.

0 Tissue Genomic DNA Extraction Kit 动物组织和细胞基因组 DNA 提取试剂盒 (快速型) (适合从动物组织和细胞中提取基因组 DNA) 目录号:K2301 试剂盒组成 试剂盒组成 K2301-50 (50 次) KarrotenTM Mini Column

50 2 ml Collection Tube

50 Buffer KB (Column solution)

15 ml Buffer KBL1 (Lysis solution)

2 *30 ml Buffer KW1 (Wash solution )

50 ml Buffer KW (Wash solution ) 使用前加入无水乙醇

50 ml Buffer KE (Elution solution)

15 ml

2 储存条件 本试剂盒在室温(15-25 ℃)下可保存一年. 产品特点: Karroten TM Tissue Genomic DNA Extraction Kit 采用独特的疏水膜技 术,高效去除组织蛋白等各种干扰物,提取高纯度的 DNA.试剂盒采用独 特的缓冲系统,可从多种不同类型动物组织和细胞中快速速提取基因组 DNA. 注意事项: 1. 实验前准备工作:在实验开始前,详细阅读该手册熟悉各步骤,并 准备好所有的试剂盒组分,1.5 ml 和2ml 灭菌离心管,以及

37 ℃和65 ℃ 的温浴条件. 2. KBL1 和KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀, 可在 37-50℃温浴片刻. 3. Buffer KW 第一次使用前请按瓶上标签加入

50 ml 无水乙醇.每次使 用后,请立即拧紧盖子. 操作步骤:

(一)平衡吸附柱 1. 取一 KarrotenTM Mini Column 柱装在一个

2 ml 收集管上(已备) . 加入

300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内,室温

13 000 rpm 离心

1 min,使平 衡液完全流过柱子.弃收集管中的滤液,将空柱套回收集管内. 注意:柱子不平衡,将导致 DNA 产率减少.

(二)样品处理 2. A. 组织破碎: 可根据不同样品选择以下方法: 1)液氮研磨: 组织直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织 变软,再加少量液氮,再研磨,如此三次,按5-50 mg 组织/1ml 加入 KBL1,

3 混匀, 静置

2 min, 转入离心管, 13,000 rpm, 常温离心,

2 min (低温可能造成 KBL1 结晶,应在 50℃下保持 KBL1 溶解状态). 2) 直接研磨: 对于新鲜的动物组织, 可以按照 5-50 mg 组织/1ml 加入 KBL1,直接研磨后,转入离心管, 13,000 rpm 常温离心,2 min. 3) 匀浆: 组织样品按每 5-50 mg 组织加入

1 ml KBL1.用电动匀浆器充 分匀浆约需 1-2 分钟.匀浆液转入离心管, 13,000 rpm 常温离心,2 min.(效 果最佳,强烈推荐) B. 裂解细胞:培养贴壁细胞:不须消化,可直接用 KBL1 进行消化、 裂解,KBL1 体积按

10 cm2 /ml 比例加入;

悬浮细胞可直接收集、裂解,每1ml KBL1 可裂解 5*106 动物细胞, 裂解液加入后, 静至 2min. 转入离心管, 13,000 rpm 常温离心,2 min. 注意:基因组 DNA 的纯度取决于 KBL1 的体积和标本的量,理论上 KBL1 的体积越大,标本的量越少, DNA 质量越好! 不同的组织有不同 的最佳比例,请在正式实验前摸索.

(三)吸附 3. 将上清液或裂解液转移到已平衡过的吸附柱内,室温

13 000 rpm 离心30 s,使裂解液完全流过柱子.保留柱,弃去收集管中的过滤液,将吸附 柱重新放入收集管. 注意:1)室温太低可能造成 KBL1 混浊或沉淀,在37 ℃温浴片刻即 可. 2)如混合液体积过大,可以分成数次上柱,每次上样量不要超过

700 μl. 4.(可选) 加入

30 μl 浓度为 20-50 μg/ml 的RNase A 于柱的膜上,

37 ℃ 放置 5-10 min. 注意:本试剂盒没有配备 RNase A 溶液.一般来说,这一步没有必要, 因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有吸附能力.如果实验要求不能残留微量 RNA,可采用这一步处理.

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