PDF《Karroten》

(四) 漂洗 5. 加入

700 μl Buffer KW1,室温

13 000 rpm 离心

30 s,弃去收集管中 的过滤液,保留柱. 6. 加入

700 μl Buffer KW,室温

13 000 rpm 离心

30 s,弃去收集管中的 过滤液,保留柱. 注意: Buffer KW 在首次使用之前必须加入

50 ml 无水乙醇, 并置于室 温下保存. 7. (可选)重复用

700 μl 70%乙醇(室温)洗涤柱子.室温

12 000 rpm 离心

1 min. 8. 弃收集管中的滤液,将空柱套回

2 ml 收集管内.室温下,最高转速 或13

000 rpm 离心

2 min 以甩干柱子基质残余的液体. 注意: 此步骤不可省, 否则将导致乙醇残留于 DNA 中, 影响后续反应.

(五)洗脱 9. 把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上,加入

50 μl 的KE(可用灭菌 的TE

10 mM Tris-HCl,pH 8.0 或纯水代替,纯水可预先用 NaOH 调pH 值至8.0),65 ℃放置 5-10 min,13

000 rpm 离心

1 min 以洗脱 DNA.(也可 以将 KE 预热至 65℃,再加至膜上,可以减少放置时间至 1min) 注意:小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位,并确保液体将膜全部覆盖. 10. DNA 可保存于

4 ℃,若长时间保存,可冻存于-20 ℃. Karroten 中国授权生产商 南京卡罗登生物科技有限公司 www.karroten.com 南京市玄武区小卫街胜利村路

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