DOC《上海万安生物科技有限公司》

上海万安生物科技有限公司 植物活性氧(ROS)定量检测试剂盒(ELISA) 使用说明书 仅供科研使用,不得用于医学诊断.

使用前仔细阅读本说明书. 用途: 用于定量检测植物血清、血浆及相关液体样本中活性氧(ROS)的含量. 工作原理 本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA),测定样品中植物活性氧(ROS)的水平.向预先包被植物活性氧(ROS)抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的活性氧(ROS)抗体,经过温育和洗涤,去除未结合的组分,然后再加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅与样品中植物活性氧(ROS)的浓度呈正相关. 试剂盒组成

1 标准品 0.3ml*6管7显色剂B液6ml

2 酶标包被板 12孔*8条8终止液 6ml

3 酶标试剂 6ml

9 说明书 1份420*浓缩洗涤液 25ml

10 封板膜 2张5样品稀释液 6ml

11 密封袋 1个6显色剂A液6ml 注:标准品(S1-S6)的浓度依次为:

0、

25、

50、

100、

200、400 IU/ml 需要而未提供的试剂和器材 37℃恒温箱. 标准规格酶标仪. 精密移液器及一次性吸头 蒸馏水, 一次性试管 吸水纸 注意事项 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟.酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差 建议所有标准品、样本都做双份检测. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜. 不用的其它试剂应包装好或盖好.不同批号的试剂不要混用.保质前使用. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下. 洗板方法 手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;

在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;

将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟.根据需要,重复此过程数次. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中 标本要求 1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性. 2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验.若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 操作程序 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔.在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl;

在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍).每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外.轻轻晃动混匀,37℃温育60分钟. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.如此重复5次,拍干. 每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色). 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值). 测定应在加终止液后15分钟以内进行. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度.也可以使用各种应用软件来计算.应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数. 操作程序总结: 准备试剂,样品和标准品 加入准备好的样品、标准品和酶标试剂,37℃反应60分钟 洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟 加入终止液 15分钟之内读OD值 计算 检测范围:12.5IU/ml→400IU/ml. 规格: 96T/盒 保存: 2-8℃ 有效期: 6个月(2-8℃).