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1、Galectin-

1、Galectin-3等. 随后,我们对部分筛选出的已知基因,如Annexin A

1、galectin-1和galectin-3进行了表达及功能学分析.我们利用免疫组化、荧光定量PCR检测galectin-1在大肠癌转移细胞株和各阶段组织标本中的表达,结果显示galectin-1可能促进大肠癌转移过程,并与大肠癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移呈正相关,我们的研究还支持了galectin-1在肿瘤相关间质和肿瘤免疫防御中的作用,可能是参与肿瘤血管形成的重要靶点.我们利用原位分子杂交和免疫组化检测Annexin A1在大肠癌不同转移能力细胞株和不同阶段大肠癌标本中的表达,结果显示AnxⅠ蛋白与大肠癌发生发展和转移密切相关,与肿瘤分化程度和组织学类型无关,AnxⅠ蛋白可作为反映大肠癌生物学行为和判断预后的重要指征.我们利用荧光定量PCR和免疫组化检测galectin-3在大肠癌转移细胞株和各阶段组织标本中的表达,发现galectin-3表达与大肠癌的癌变、侵袭能力及转移密切相关,与分化程度呈反比.此外,我们又对6个未知EST片段进行拼接并检测其在大肠癌组织中的表达,但拼接出的全长新基因的表达与大肠癌并无相关性,此部分研究未能继续. 我们采用了Affymetrix HG-U133Plus2.0人类基因组芯片,对来源同一亲本、具有不同转移潜能的大肠癌细胞系SW480(低转移)、SW620(来自SW480的淋巴结转移灶)及SW480/M5(将SW480细胞株在裸鼠回盲部反复原位接种,通过5次以上筛选获得的具有高选择肝脏转移特征的SW480亚系,在本实验室建立)进行差异基因表达谱分析,以SW480细胞株为参照系,筛查出SW

620、SW480/M5两种细胞系共同表达的差异表达基因共422个,其中两组均上调的基因&

ESTs 298个;

均下调的基因&

ESTs 124个.通过GO分析和文献轮廓挖掘微阵列表达数据等生物信息学方法,探索这些基因的功能关系及发现新的大肠癌转移候选基因,结果我们从中筛选出5个可能与肿瘤侵袭、转移相关但功能研究很少的候选基因,其中作为Formins家族成员之一的FMNL2基因引起了我们的兴趣,被作为一个研究大肠癌侵袭、转移的新靶点.目前关于FMNL2的功能学研究甚少,仅有3篇文献报道(2篇来自本课题组的研究). 我们首次探讨了FMNL2与大肠癌侵袭、转移的关系及其作用机制,(1)利用免疫组化、Western blot和荧光定量RT-PCR检测FMNL2在大肠癌不同转移能力细胞株和不同阶段大肠癌组织中的表达,结果显示FMNL2的表达与大肠癌的发生、转移呈正相关,但与癌组织的浸润深度、分化、肿瘤的位置无关.(2)构建了FMNL2稳定转染及沉默的表达载体,观察FMNL2过表达及敲除后对大肠癌细胞体外增殖、粘附、运动、侵袭及体内转移能力的影响,结果显示FMNL2的外源性表达能促进大肠癌细胞体外增殖、运动、侵袭能力,而FMNL2基因沉默后呈??㈠?传??捡?汤抵K?恶??汤整吭?_?I档牡?????捩潲が?卉????n?十??A?????桢略?扫数ば?润\????次胯?y??w买M汤??????垩倭J???M?栗整?畔?ㄠ?u?????Z?F???汤?挠??敌{桴????k?条???桡HJ????桡HJ?悭??污??L灯l灵汰??桡HJ?l灵汰??桡HJ?l?毕??桡HJ?锏??污??L灯潲琐??污??吨??桡HJ?l???污????污??L灯胩狸??污??潮??桡HJ?l???污????污??L灯@慨??桡HJ?@慨??桡HJ?l?湾獭??污??湾獭??污??L灯E?I?桡HJ?E?I?桡HJ?l?L睦暝??污??L睦暝??污??L灯樯?I?桡HJ?樯?I?桡HJ?l?橹暝??污??橹暝??污??L灯焯睹?I?桡HJ?焯睹?I?桡HJ?l?|暝??污??|暝??污??L灯OZ向上皮样形态转化,伴E-cadherin, α-catenin, γ-catenin的表达上调及vimentin, snail, slug的表达下调.FMNL2的沉默降低了TGF-β诱导的EMT及癌细胞的侵袭能力,FMNL2还通过MAPK/MEK信号通路参与了EMT过程.(5)参与FMNL2调节作用的可能的基因及信号通路,我们利用cDNA芯片检测了FMNL2干扰前后基因表达谱的变化,获得FMNL2相关基因545个,包括与FMNL2作用协同的基因222个,作用拮抗的基因323个.对获得的基因进行信号通路分类发现,参与FMNL2调节作用的基因主要涉及了Wnt通路、凋亡通路、p53通路、Rho通路、PI3K通路、Cadherin通路等;