DOC《胶体金试纸条检测H5N1亚型禽流感病毒操作程序》

胶体金试纸条检测H5N1亚型禽流感病毒操作程序 1样品处理:取病变典型的肺脏和肝脏等发病器官,称重,磨碎,用生理盐水配成1:2(W/V)的组织悬液,反复冻融3次后,3000r/min离心30min,取上清液即为BC6/85强毒样品.

2操作步骤 2.

1、将密封袋打开,取出试纸板/条. 2.

2、取40ul待检样本加在试纸条/板的加样区,在加样区滴加1滴稀释液. 2.

3、30分钟内观察并记录试验结果.

3 结果判断 3.1阳性结果:在试纸条/板的检测线和质控线位置上各出现一条紫红色条带. 3.2阴性结果:仅试纸条/板的质控线位置上出现一条紫红色条带. 3.3无效结果:在试纸条/板的检测线和质控线位置上均未出现紫红色条带.

4 注意事项 4.

1、被检样品、试剂应在室温〔20℃左右〕平衡并在该条件下检测.要求被检样品为新鲜样品.如发现试纸条/板密封袋破损则需废弃. 4.

2、当质控线与检测线上均不出现紫红色条带时,应重新测试,如果问题仍然存在,应立即停止使用此批号产品并与制造单位联系. 4.

3、当样品中抗体含量极高时,质控线条带有所减弱,此结果仍视为有效结果(若需进一步确证,可用抗体阴性血适量稀释后再作测试). 4.

4、本产品仅供体外诊断初筛,勿作为确认试剂,阳性结果须进行确证试验确证. 4.

5、本测试过程中需接触强毒样品,请按传染病试验室规程操作. 4.

6、30分钟后观察结果无效 4.

7、有效期12-18个月 4.

8、-20℃~20℃避光干燥保存. H5N1亚型禽流感病毒快速诊断试纸条的研制 摘要:本文简述了如何以胶体金免疫层析技术,构造H5N1亚型禽流感病毒快速诊断试纸.该试纸主要由检测端,显色区和手柄区三部分组成,能够在短时间内完成对H5N1亚型禽流感病毒的诊断,且无需任何设备,具有简便快速、敏感、特异的特点. 关键词: H5N1亚型禽流感病毒 快速诊断试纸 胶体金 免疫层析 H5N1亚型禽流感是由H5N1亚型禽流感病毒引起的一种急性高度接触的传染病,给各国的养鸡业带来巨大的经济损失.目前该病的主要检测方法是琼脂扩散试验、HI、PCR技术等,这些方法都局限于实验室进行,并且需要熟练的检测人员,给疾病的检测带来极大的不便.为了建立快速、敏感的H5N1亚型禽流感病毒检测技术,本文探讨了如何用胶体金免疫层析技术构造H5N1亚型禽流感病毒快速诊断试纸.

1 .快速诊断试纸的原理 快速诊断试纸首先利用的是免疫层析的原理,将抗原或抗体固定在层析介质上,相应的抗原或抗体通过毛细泳动,与特异性物质结合后即滞留在该位区,根据显色反应即可做出判断,显色技术用的是胶体金免疫显色,胶体金颗粒易于制备,当每平方毫米空间的颗粒密度达到107时,即可出线肉眼可见的粉红色斑点,同时引起保存、使用方便而被广泛的应用于生物学、医学等领域. 2.快速诊断试纸的构造 快速诊断试纸根据胶体金免疫层析原理设计,由检测端,显色区和手柄区三部分组成,含有支撑层和反应试剂吸附层.测试端由玻璃纤维膜构成,吸附相应的抗原或抗体;

显色区有硝酸纤维膜构成,其上含有判定结果的检测线和对照线;

手柄端由吸水材料构成 3. 快速诊断试纸的研制思路 在测试段玻璃纤维膜上包被金标记鼠抗AIV单克隆抗体(Au-Ab1),再显色区NC膜的检测线和对照线处分别包被鼠抗AIV单克隆抗体(Ab1)和兔抗鼠IgG多克隆抗体(Ab2) 若待检液中含AIV,当检测液进入测试端时其中的Au-Ab1和AIV形成Au-Ab1―IBDV复合物,复合物在NC膜上层析泳动,被检测线上的Ab1拦截,形成Au-Ab1―AIV―Ab1的复合物,并在检测线处形成棕红色的条带;