DOC《福建信发招标代理有限公司关于福建省动物疫病预防控制中心...》

96 孔微量 板.被检样品加入包被孔孵育,血清样品中的特异性 IBV 抗体与包被的病毒抗原反应,形成复合物.经过洗涤,未结合的物质被去掉.微孔加入酶标抗体,酶标抗体可以与吸附在包被孔内的鸡抗体结合.反应后进行洗涤,未结合的酶标抗体被洗去.加入酶底物,随后的颜色反应强度与 血清中 IBV 抗体的数量直接相关. 试剂 数量

1 IBV 抗原包被板

5 块2阳性对照―稀释的含 IBV 抗体的鸡血清,用叠氮化钠保护 1*1.9mL

3 阴性对照―稀释的不含 IBV 抗体的鸡血清,用叠氮化钠保护 1*1.9mL

4 酶标抗体―(山羊)抗鸡:辣根过氧化物酶(HRPO)结合物,庆大霉素和凯松保护 1*50mL

5 样品稀释液―用叠氮化钠保护 1*235mL A TMB 底物 1*60mL B 终止液 1*60mL 自备器材 精确的单道移液器,多道移液器,一次性吸头,96 孔读数仪,样品稀释用试管,蒸馏水或去 离子水,洗液吸移装置.在操作步骤中所列出的试剂吸取体积要求移液器的误差不超过±5%. 注意事项 要认真处理所有的传染性支气管炎病毒(IBV)生物材料,以防 IBV 的传播.抗原包被的反应板有可能成为 IBV 的传染源.尽管在进行包被之前已对抗原进行了化学性的灭活处理,但不要假设它已完全灭活.一些试剂盒成份含有叠氮化钠作保护剂,要按照当地、区域以及国家法规 进行处理.不要使 TMB 溶液暴露在强光或任何氧化剂条件下.所有的组分贮存于 2-8℃.所有的组分在丢弃前要进行无害化处理.不要使用过期的组分,也不要把不同批次的试剂盒组分混用. 在整个操作过程中,滴加和洗涤要仔细.按照本程序操作,将会获得最佳结果.仅供兽医使用. 样品准备 在检测前用样品稀释液将样品作

500 倍稀释(1?L 的样品用样品稀释液稀释到 500?L).注意不要稀释对照.每个样品都要换一个吸头.样品加入抗原包被孔之前要充分混合均匀. 操作步骤 所有试剂需回温至 18-26℃,颠倒摇动混合均匀.

1 取出包被板,记录样品位置.

2 在合适位置的两孔中加入100?L不需稀释的阴性对照.

3 在合适位置的两孔中加入100?L不需稀释的阳性对照.

4 加100?L 稀释好的样品至相应的孔.样品可采用双孔检测也可采用单孔检测.

5 在18-26℃孵育30分钟(±2 分钟).

6 将孔内的液体倒入合适废液筒内.

7 用大约350?L蒸馏水或去离子水洗涤微孔3-5次,最后一次洗涤后吸干板孔内液体.

8 每孔加入100?L 酶标抗体.

9 在18-26℃孵育30分钟(±2分钟).

10 重复步骤6和7.

11 每孔加100?L TMB底物溶液.

12 在18-26℃下孵育15分钟(±1分钟).

13 每孔加100?L终止液终止反应. 14在650nm测量和记录吸光值A(650). 结果 只有在阳性对照平均值减去阴性对照平均值(PC - NC )大于 0.075 时,且阴性对照平均 值小于或等于 0.150 时,测定结果才有效.IBV 抗体的存在与否由样品对阳性的 S/P 值来决定.阳性对照是标准化的,代表鸡血清的有效抗体水平.样品抗体的相对水平由样品对阳性的 S/P 比值来决定.终点滴度可以通过后面列出的关系式计算得出. 计算方法

1 阴性对照平均值(NC) =NC

2 阳性对照平均值(PC ) =PC

3 S/P 值4终点抗体滴度(1:500)与S/P 的关系式: 滴度=1.09(S/P)+3.36 结果判定 血清样品的 S/P 值小于或等于 0.2,判为阴性.样品的 S/P 值大于 0.2(滴度大于 396),判为阳性,表明已接种过疫苗或感染过 IBV.每个实验室应建立独自的免疫的抗体滴度标准.此滴 度是根据实验室目前对 IBV 的检测方法和过去对特种疫苗和免疫方案的抗体反应两方面综合而定.在免疫时效期监测和记录有代表性样品的抗体滴度是鸡群的免疫状况的最好评价.得出的鸡群状况可对免疫全程中抗体滴度的分布和变化进行分析. (5)购买时间及网上报名时间由原先的: 购买时间及网上报名时间:凡有意参加投标者,请于2015年5月25日起至2015年6月12日,每日9:00到12:00,14:30到17:30(北京时间,下同),投标人须先在省级政府采购网上的电子化采购平台(http://cz.fjzfcg.gov.cn)上进行注册、报名、提交投标保证金底单,绑定CA卡(CA卡申请需提前办理.办理客服