DOC《中文说明书 UNIONHONEST》

200 pg/ml (5号标准品) 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液

100 pg/ml (4号标准品) 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液

50 pg/ml (3号标准品) 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液

25 pg/ml (2号标准品) 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 12.5 pg/ml (1号标准品) 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液

0 pg/ml (空白对照) 原始浓度不用稀释直接加入50ul. 洗涤缓冲液(50*)的稀释:蒸馏水50倍稀释. 操作步骤 使用前,将所有试剂充分混匀.不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数.每个标准品和空白孔建议做复孔.每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔.标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内.立即加入50ul的生物素标记的抗体.盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟.避免光照. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果. 在450nm波长处测定各孔的OD值. 建议使用的实验方案 标准品浓度(pg/ml) A

400 400 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 B

200 200 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 C

100 100 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 D

50 50 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 E

25 25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 F 12.5 12.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 G

0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 局限 6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果. 试剂盒性能 1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品.稀释度的线性.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990. 2. 特异性:不与其它细胞因子反应. 3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%. 结果判断与分析

1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的Estrogen标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的Estrogen含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度.

3、检测值范围:0-400pg/ml

4、敏感度: 1.0pg/ml