编辑: 捷安特680 | 2019-07-04 |
当激发源移去以后仍能持续发光的为磷光物质(荧光寿命在1微秒~10毫秒)或长余辉发光物质(荧光寿命大于10毫秒). 荧光寿命τ fluorescence lifetime 当某种荧光物质被一束激光激发后,该物质吸收能量后从基态跃迁到某一激发态上,再以辐射跃迁的形式发出荧光回到基态.当激发停止后,物质的荧光强度降到激发时最大强度的1/e所需的时间称为荧光寿命,它表示粒子在激发态存在的平均时间,通常称为激发态的荧光寿命. 荧光发射光谱EM fluorescence emission spectrum 选择某一固定波长的光激发样品,记录样品中产生的荧光发射强度与发射波长间的函数关系,即得荧光发射光谱. 荧光激发光谱Ex fluorescence excitation spectrum 选定某一荧光发射波长记录荧光发射强度与激发光波长的函数关系,即得荧光激发光谱. 校正光谱 calibration spectrum 由于荧光测量仪器的特性,例如光源的能量分布、单色器的衍射效率和检测器的响应等性能会随波长而变,所以同一化合物在不同的仪器上会得到不同的光谱,且彼此间无类比性,这种光谱称为 表观 光谱,要使同一化合物在不同的仪器上能得到具有相同特性的荧光光谱,则需要对仪器的上述特性进行校正,经过校正后的光谱称为校正荧光光谱(亦称真正的荧光光谱). 荧光强度 fluorescence emission intensity 在一定的激发波长作用下,荧光物质发生的荧光强弱. 斯托克斯位移 stokes shift 激发峰位和发射峰位的波长之间的差值,是一个表征物质发光特性的物理常数,它表示激发态荧光物质在回到基态以前,在激发态寿命期间能量的消耗. 光致发光量子产率PLQY photoluminescence quantum yield 又称荧光量子效率,是指激发态分子中通过发射荧光而回到基态的物质占全部激发态物质的分数,也即荧光物质吸光后所发射的荧光光子数与所吸收的激发光光子数之比值,通常情况下总是小于1. 荧光偏振Fp fluorescence polarization 当用偏振光激发荧光物质时,荧光物质发射偏振光.这种偏振发射是由荧光物质的取向对激发光子和发射光子振动方向具有选择性引起的.荧光偏振和荧光各向异性是对荧光体的同一发光性质的不同的表示. 同步荧光扫描 synchronous fluorescence scans 与常规荧光测定方法的最大区别在于同步荧光扫描是同时扫描激发波长和发射波长,荧光强度信号与对应的激发波长(或发射波长)构成光谱图,称为同步荧光光谱. 三维荧光光谱 three-dimensional fluorescence spectrum 又称总发光光谱,激发-发射矩阵,等高线谱等.描述荧光强度同时随激发波长和发射波长变化的关系图谱,即为三维荧光光谱.三维荧光光谱包含所有稳态荧光光谱信息. 时间分辨发射(激发)光谱 time-resolved emission(excitation) spectrum 简称TRES,是荧光衰变过程中不同的时间对发光谱进行快速扫描,其荧光强度是时间和波长的函数. 荧光(磷光)寿命动力学 fluorescent/phosphorescent lifetime dynamics 指在极短时间内(ms~s)连续采集荧光(磷光)寿命,获得寿命随时间的变化趋势. 可变波长荧光动力学扫描 changeable wavelenth fluorescence kinetics scanning 指多组激发波长和发射波长对按照 顺序 或 交错 式荧光动力学扫描,可在极短时间内(几十秒或几分钟内)获得多组荧光波长对的动力学信息. 反Stokes荧光 anti-Stokes fluorescence 对所有长波激发短波发射的发光现象的统称,因与正常荧光的Stokes现象相反而称为反Stokes荧光,主要包括上转换荧光和多光子荧光. 方法原理 荧光定性定量分析 荧光分析是指利用某些物质在特定光的激发下产生特定波长和特定强度荧光的特性进行物质的定性和定量的分析方法. 荧光定性分析常采用直接比较法,将试样与已知物质同时放在相同的光激发下,根据它们所发荧光的波长和强度,鉴定它们是否含有同一荧光物质.最常用的方法是用荧光分光光度计绘制试样的荧光激发光谱和荧光发射光谱,并与已知物质的这两种光谱进行比较,从而鉴定所含成分. 荧光定量分析是先将已知的荧光物质配成不同浓度的标准溶液,用荧光分光光度计测量其在某一特定激发波长和强度处的某一特定发射波长的荧光强度,荧光(磷光)强度与物质浓度的关系为: 1) 式中: F ―荧光强度 K'