DOC《第三届全国魔芋种植基地建设经验交流会》

10 d and direct buds and roots were differentiated from the callus edges. In the same media One-step-seedlings formation could be formed from the explants for

38 d . A high frequency of seedling formation reached 95%. The 50~100g tubers were formed after transplantation for 5~6 months and plants grew vigorously. Keywords Amorphophallus konjac K. Koch;

rowing point;

tissue culture;

browning;

one-step-seedlings-formation 魔芋是天南星科(Aracceae)魔芋属(Amorphophallus Blume)多年生草本植物,具有较发达的地下块茎,富含丰富的葡甘露聚糖(Gluco―mannan),葡甘露聚糖由于其特殊的理化性质,在工业、食品、医药等上有着广泛的利用价值和开发价值[ 1,2 ].魔芋主要经无性繁殖繁育种芋,其繁殖系数低,并且长期的无性繁殖种芋带病严重,品质退化,优良种芋的奇缺已成了魔芋产业发展的一个瓶颈问题.魔芋组织培养技术的研究前人[3,4]已做了许多工作,但繁殖周期长、繁殖系数低、成本高限制了这一技术在魔芋生产中的应用,因此进一步完善魔芋组培技术,无论在科学研究和实际应用上都有着较大的意义.基于这一目的,近几年我们对魔芋的组培技术进行了系列研究,建立了高效的魔芋组培快繁体系.本文主要以花魔芋顶端生长点为外植体,通过对培养基激素配比调节,建立高效的魔芋组织培养的一步成苗法.简化培养程序、提高成苗率、降低生产成本、缩短了培养周期,为优质魔芋种苗产业化生产提供了技术支撑. 材料与方法1材料 采自云南省富源花魔芋(A.konjac),块茎直径10cm左右、刚萌发的健壮顶芽.

2 方法 2.1 材料和处理 萌发1cm左右花魔芋的顶芽,自来水冲洗数次,75%乙醇表面消毒3 s→0.1% Hgcl2 灭菌15 min→无菌水冲洗

3、4次→无菌条件下通过解剖镜剥取顶端生长点,分别接种于①五种诱导培养基上. 云南省科技厅 十五 攻关项目 2.2培养基 诱导培养基:① MS + 6BA 1mg ・ L-1+ 2,4-D 0.2 mg ・ L-1,② MS + 6BA

1 mg ・ L-1+ 2,4-D 0.1 mg ・ L-1,③ MS + 6BA

1 mg ・ L-1 + 2,4-D 0.05 mg ・ L-1,④ MS + 6BA

1 mg ・ L-1 + NAA 0.5 mg ・ L-1,⑤ MS + 6BA

1 mg ・ L-1 + NAA

1 mg ・L-1 分化培养基:⑥MS + 6BA

2 mg ・ L-1 + NAA

1 mg ・ L-1 生根培养基:⑦1/2MS + NAA

2 mg ・ L-1

3 培养条件 将已接种在培养基上的材料放入培养温度25±2℃,光照8 h,光强1500lx的培养室内进行培养. 实验结果1诱导培养 接种在①诱导培养基上的外植体,经10天左右培养大多都开始膨大,膨大的外植体约8天形成愈伤组织,不膨大的材料随着培养时间的延长而不断褐变死亡.如表1所示,外植体对不同激素配比的培养基其反应不同(表1): 表1 培养基中不同激素浓度配比对诱导率的影响 Table

1 Effects of different hormons on callus induction 培养基 接种数(块) 培养天数 外植体膨大 块数 外植体膨大率(%) 诱导天数 外植体形成愈伤组织块数 诱导率(%) 褐变块数 褐变率(%) ①②

50 50

10 10

10 26

20 52

8 8

2 19

4 38

48 31

96 62 ③

50 10

35 70

8 33

66 17

34 ④ ⑤

50 50

10 10

41 44

82 88

8 8

39 44

78 88

5 6

10 12 注:诱导天数从培养天数以后计算 随着生长素2,4-D浓度的不断下降,细胞分裂素浓度的相对提高,外植体愈伤组织诱导率在不断提高,而褐变率则随之下降.生长素NAA对魔芋生长点愈伤组织有着很好的诱导作用,在浓度0.5-1.0 mg ・ L-1时愈伤组织的诱导率达80%左右.一定浓度配比的6BA和NAA(④、⑤培养基)外植体在诱导出愈伤组织的同时还分化出幼苗(图1). 图1 外植体形成愈伤组织及幼芽 把在诱导培养基①、②、③诱导出的愈伤组织转入分化培养基⑥进行分化培养培养,④、⑤培养基的愈伤组织部分转入⑥培养基分化培养,部分植入新的④、⑤培养基中继续培养,结果见表2. 2分化培养 表2 魔芋愈伤组织的分化培养 Table