DOC《附录2》

附录2 动物源耐药性监测的采样、检测技术要点

一、采样安排

(一)采样地点选择 中国兽医药品监察所选取河北、江西、湖北、广西、北京、云南等6个省市的10-20个养殖场;

中国动物卫生与流行病学中心选取山东、内蒙、湖南等3个省市的10-15个养殖场;

辽宁、上海、成都和广东、河南等5省(市)耐药性监测实验室在本省(市)(或周围地区)选择养殖场6-15个.

每个实验室应选择6个养殖场(鸡场和猪场各半),定点、定季度采集大肠杆菌和肠球菌,进行耐药性跟踪监测.

(二)采样类型 利用棉拭子采泄殖腔、盲肠(禽)和肛门(猪)作大肠杆菌、肠球菌和空肠弯曲杆菌分离;

主要从成鸡盲肠采样,也可从孵化后期死亡鸡胚采样分离沙门氏菌;

选择奶牛场1~2个,采取新鲜牛奶分离金黄色葡萄球菌.根据养殖场规模,每个场采样30~50份.

(三)监测的细菌种类 包括大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲杆菌、猪多杀巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌.沙门氏菌和金黄色葡萄球菌可根据各地分离情况进行监测.

二、认真做好调查和记录 各承担任务单位要认真做好饲料和饲料药物添加剂来源与种类调查、采样前动物使用抗菌药物情况调查(预防用药和治疗用药)和采集样品的统计,据实填写采样记录表.

三、细菌的分离鉴定 采用特殊培养基,定向做大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和弯曲杆菌分离,用生化试验、PCR技术或血清学方法对分离物进行鉴定.本年度各实验室分离细菌的种类和数量见附件1.将分离到的菌株在-20℃以下加甘油保护剂冷冻保存或用其它合适方法保存.

四、耐药性测定 用中国兽医药品监察所提供的药敏板进行耐药性检测.将测定结果正确填入耐药性检测结果统计表(见附件5).检测用质控菌株由中国兽医药品监察所统一供应.

五、结果报送 各实验室的采样情况和耐药性检测结果,应填入《采样记录表》和《耐药性检测结果统计表》统一报送中国兽医药品监察所,经统计分析后上报农业部兽医局. 结果的上报分电子版和纸质2部分,电子版直接登录动 物源细菌耐药性数据库 上报.纸质结果的上报要求统一格式、统一内容.主要内容分6部分阐述:(1)本年度任务简述;

(2)细菌分离情况;

(3)耐药性监测情况;

(4)耐药性监测结果分析;

(5)存在问题;

(6)改进措施和建议. 附录3 采样记录表 采样地:养殖场: 采样时间:联系人姓名、

电话: 样品来源 猪 日龄 ____ 鸡 日龄 ____ 牛 日龄 ____ 其他________日龄 ____ 消化道 呼吸道 泌尿生殖道 肝胆 脑 淋巴结 关节 奶样 皮肤 粪便 其他_ 采样动物健康状况 养殖量 健康 发病及症状: . 采样养殖场使用抗菌药情况 饲料来源、添加抗菌药种类 治疗用抗菌药种类与使用方式 生产厂名称 饲料添加的药物名称 剂量 使用时间 药物名称 使用方式 剂量 单个动物剂量 饮水添加剂量 饲料添加剂量 用药天数 样品分离菌株 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 肠球菌 沙门氏菌 空肠弯曲杆菌 其他_菌株编号: 注:菌株编号按照 菌种、来源-采样地、采样年月-菌株编号 的格式进行.如EB-L0701-0001,其中:E(大肠杆菌)B(牛)L(鲁)07(年)01(月)-0001(菌株编号). 菌种简写建议为:EC(大肠杆菌)、S(沙门氏菌)、SA(金黄色葡萄球菌)、ECi(肠球菌)、CJ(空肠弯曲杆菌)、CC(结肠弯曲杆菌) 动物简写建议为:B(牛)、P(猪)、C(鸡) 注:a为喂奶猪或保温鸡,b为保育猪或生长鸡,c为育成猪或鸡,d为种母猪或产蛋鸡. 附录4 动物源细菌分离和鉴定方法