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51wendang.com/ 本文档下载自文档下载网,内容可能不完整,您可以点击以下网址继续阅读或下载: http://www.51wendang.com/doc/b1b4009e62f08ad0a4069aa8 植物转基因育种技术 转基因技术 与作物育种 [此处图片未下载成功] 转基因育种的概念与优点 转基因育种技术的一般操作过程 转基因育种技术的应用成果 转基因的安全性 [此处图片未下载成功]

第一节 植物转基因育种概念及优点作物转基因育种 就是根据育种目标,从供体生物中分离目的基因,经DNA重组与遗传转化或直接运载进入受体作物,经过筛选获得 稳定表达的遗传工程体,并经过田间试验与大田选择育成 转基因新品种或种质资源.转基因作物(GMC,genetically modified crops) [此处图片未下载成功] 与常规育种技术相比,转基因育种在技术上较为复杂,要求 也很高,但是具有常规育种所不具备的优势:1.拓宽可利用的基因资源;

2.培育高产、优质、高抗优良品种提供了崭新的育种途径;

3.可以对植物的目标性状进行定向变异和定向选择;

4. 可以大大提高选择效率,加快育种进程. 此外,还可将植物作为生物反应器生产药物等生物制品. [此处图片未下载成功] Traditional crossbreeding DNA techniques [此处图片未下载成功]

第二节 植物转基因技术的一般操作过程 [此处图片未下载成功] [此处图片未下载成功] 技术路线目的基因分离 植物表达载体的构建 遗传转化受体材料的准备 转化组织 炼苗 转化植株筛选 组织脱分化 [此处图片未下载成功] 1.目的基因的分离 (1)已知基因的获得 ①化学合成法 ②PCR扩增 (2)未知基因的获得 ①构建基因组文库,筛选目的基因 ②构建cDNA文库,筛选目的基因 ③mRNA差异显示技术筛选差异表达基因 ④差异蛋白质谱表达技术筛选功能基因 ……9 [此处图片未下载成功] 2.植物表达载体的构建④ ://www.51wendang.com/doc/b1b4009e62f08ad0a4069aa8⑤pGEM-T ① ② ③ ⑥ ⑦ ⑥ ①银杏叶RNA提取 ②反转录cDNA ③chs全长cDNA的克隆 ④TA克隆及测序 ⑤向chs两端引入酶切位点 ⑥双酶切 ⑦定向克隆 ⑧导入农杆菌 ⑧ [此处图片未下载成功] 3.受体材料的准备 细胞的全能性:分化细胞脱分化 再分化 [此处图片未下载成功] 4.遗传转化 (1)间接转化法――农杆菌介导转化法 (2)直接转化法 A、 基因枪转化法 B、 电击法 、花粉管通道法D、 PEG介导基因转化法 [此处图片未下载成功] 根癌农杆菌 (Agrobacterium ),是一种革兰 氏阴性土壤杆菌,它含有Ti质粒,能诱导被侵染的 植物细胞形成肿瘤,即诱 发冠瘿瘤.Ti质粒(包括Ri 质粒)上有一段转移DNA, 在农杆菌侵染宿主植物时, 这段DNA可以转移进植物 细胞,并稳定地保留在植 物细胞染色体中,变为植 物细胞新增加的一群基因, 最终能通过有性世代遗传 给子代 . 返回13 [此处图片未下载成功] 基因枪转化法由美国Cornell大 学的Sanfor (1987)提出,它的主 要原理是将包含目的基因的载体 包被在微小的金属微粒(钨粒或金 粒)表面,通过高压驱动力加速微 粒穿透植物细胞壁,导入受体组织 细胞内,然后通过组织培养再生出 完整的植株. 微粒上的外源DNA进 入细胞后,整合到染色体上并得到 表达,从而实现基因的转化.. 返回14 [此处图片未下载成功] 电击法的主要原理是将原 生质体在溶液中与DNA混合, 然后利用高压电脉冲作用, 使原生质体膜的某些部位被 击穿而产生可回复的小孔, 外源DNA可通过小孔进入原 生质体内,而且不影响经电 击处理的原生质体再生植物 的能力. ://www.51wendang.com/doc/b1b4009e62f08ad0a4069aa8par返回[此处图片未下载成功] 花粉管通道法是利用开花植 物授粉后形成的花粉管通道, 直接将外源目的基因导入尚不 具备正常细胞壁的卵、合子或 早期胚胎细胞,实现目的基因 转化. 返回[此处图片未下载成功] PEG介导基因转化的主要原理是聚乙二醇(PEG)、多聚-L-鸟 核苷酸(pLO)、磷酸钙及高pH值条件下诱导原生质体摄取外 源DNA分子.PEG可促使细胞膜与DNA间接触与粘连,并通过 引起膜表面电荷的紊乱及干扰细胞间的识别,利于细胞膜间的 融合以及外源DNA进入原生质体. 返回17 [此处图片未下载成功] 表1 几种植物转基因方法比较转基因方法DNA间接转化法 农杆菌介导基因 转移 转化的优点 转化的缺点 受体种类,可以在原生质体、 转化双子叶植物为主.大 蛋细胞和细胞团、组织器官 多数单子叶植物和裸子植 或整株等多级水平上进行, 物对农杆菌的侵入不敏感, 方法成熟可靠,简便易行, 限制了该法在禾谷类作物 周期短,转化率高;