PDF《中华人民共和国国家标准》

1,7;

z6 H 多价

5 z4z23,z4z24,z4z32,z29,z35,z36,z38 H 多价

6 z39,z41,z42,z44 H 多价

7 z52,z53,z54,z55 H 多价

8 z56,z57,z60,z61,z62 每一个 H 抗原成分的最后确定均应根据 H 单因子血清的检查结果, 没有 H 单因子血清的要用两 个H复合因子血清进行核对. 检出第

1 相H抗原而未检出第

2 相H抗原的或检出第

2 相H抗原而未检出第

1 相H抗原的,可 在琼脂斜面上移种 1~2 代后再检查. 如仍只检出一个相的 H 抗原, 要用位相变异的方法检查其另一 个相.单相菌不必做位相变异检查. 位相变异试验方法如下: 小玻管法: 将半固体管(每管约

1 mL~2 mL) 在酒精灯上溶化并冷至

50 ℃,取已知相的 H 因子血清 0.05 mL~0.1 mL,加入于溶化的半固体内,混匀后,用毛细吸管吸取分装于供位相变异试 验的小玻管内,俟凝固后,用接种针挑取待检菌,接种于一端.将小玻管平放在平皿内,并在其旁 放一团湿棉花,以防琼脂中水分蒸发而干缩,每天检查结果,待另一相细菌解离后,可以从另一端 挑取细菌进行检查.培养基内血清的浓度应有适当的比例,过高时细菌不能生长,过低时同一相细 菌的动力不能抑制.一般按原血清 1:200~1:800 的量加入. 小倒管法:将两端开口的小玻管 (下端开口要留一个缺口,不要平齐) 放在半固体管内,小玻 管的上端应高出于培养基的表面,灭菌后备用.临用时在酒精灯上加热溶化,冷至

50 ℃,挑取因子 血清

1 环,加入小套管中的半固体内,略加搅动,使其混匀,俟凝固后,将待检菌株接种于小套管 中的半固体表层内,每天检查结果,待另一相细菌解离后,可从套管外的半固体表面取菌检查,或 转种 1%软琼脂斜面,于37 ℃培养后再做凝集试验. 简易平板法:将0.35%~0.4%半固体琼脂平板烘干表面水分,挑取因子血清

1 环,滴在半固体 平板表面,放置片刻,待血清吸收到琼脂内,在血清部位的中央点种待检菌株,培养后,在形成蔓 延生长的菌苔边缘取菌检查. 5.5.4.3 Vi 抗原的鉴定 用Vi 因子血清检查.已知具有 Vi 抗原的菌型有:伤寒沙门氏菌,丙型副伤寒沙门氏菌,都柏林 沙门氏菌. 5.5.4.4 菌型的判定 根据血清学分型鉴定的结果,按照附录 A 或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型.

6 结果与报告 综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报告25 g(mL)样品中检出或未检出沙门氏菌. GB 4789.4―2010

8 附录A (规范性附录) 培养基和试剂 A.1 缓冲蛋白胨水(BPW) A.1.1 成分 蛋白胨 10.0 g 氯化钠 5.0 g 磷酸氢二钠(含12 个结晶水) 9.0 g 磷酸二氢钾 1.5 g 蒸馏水

1 000 mL pH 7.2±0.2 A.1.2 制法 将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约

10 min,煮沸溶解,调节 pH,高压灭菌

121 ℃,15 min. A.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液 A.2.1 基础液 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 氯化钠 3.0 g 碳酸钙 45.0 g 蒸馏水

1 000 mL pH 7.0±0.2 除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,再加入碳酸钙,调节 pH,高压灭菌

121 ℃,

20 min. A.2.2 硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠(含5个结晶水) 50.0 g 蒸馏水 加至

100 mL 高压灭菌

121 ℃,20 min. A.2.3 碘溶液 碘片20.0 g 碘化钾 25.0 g 蒸馏水 加至

100 mL 将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中,再投入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解为止,然后加蒸 馏水至规定的总量,贮存于棕色瓶内,塞紧瓶盖备用. A.2.4 0.5%煌绿水溶液 煌绿 0.5 g 蒸馏水