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ICS 13.

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60 ws 中华人民共和国卫生行业标准WS/T 615―2018 辐射生物剂量估算 早熟染色体凝集环分析 法Estimation of radiation biological dose―analyzing premature chromosome condensation ring

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01 实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 WS/T 615―2018 I 前言本标准按照 GB/T 1.1―2009 给出的规则起草. 本标准由国家卫生标准委员会放射卫生标准专业委员会提出. 本标准起草单位: 中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所、 中国医学科学院放射医学研究 所、苏州大学. 本标准主要起草人: 刘青杰、赵骅、陆雪、刘强、朱巍. WS/T 615―2018

1 辐射生物剂量估算 早熟染色体凝集环分析法

1 范围 本标准规定了通过分析早熟染色体凝集环,对电离辐射外照射受照人员进行生物剂量估算的方法. 本标准适用于发生在受照后1个月内、吸收剂量在4 Gy~20 Gy范围内的X或γ射线、急性全身均匀 或近似均匀外照射的受照人员的生物剂量估算.

2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的. 凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件. 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件. GB/T 28236一2011 染色体畸变估算生物剂量方法

3 术语和定义 GB/T 28236一2011界定的以及下列术语和定义适用于本文件. 3.1 早熟染色体凝集 premature chromosome condensation;

PCC 利用化学或生物的方法, 间期淋巴细胞核被诱导提前进入有丝分裂期, 使间期淋巴细胞核内极度分 散状态的染色质凝缩成细纤维状的染色体样结构. 3.2 早熟染色体凝集环 premature chromosome condensation ring;

PCC-R 当早熟染色体凝集断裂后,一条染色体的两个断裂末端重接形成的环状染色体. 3.3 剂量-效应曲线 dose-effect curve 某种生物体系受到照射后的反应与受照射剂量之间存在着某种定量关系,可用适当的数学模式描 述,制备出相应的反应效应与受照剂量之间关系的刻度曲线,可用其估算受照剂量.

4 早熟染色体凝集标本制备 4.1 主要仪器和试剂配制 主要仪器和试剂配制参见附录A. 4.2 早熟染色体凝集标本制备 WS/T 615―2018

2 4.2.1 样品采集 抽取人静脉血1 mL~2 mL,注入肝素抗凝管. 4.2.2 样品接种和细胞培养 将0.5 mL肝素抗凝全血加入到4.5 mL含有20%胎牛血清的全培养基(RPMI 1640)中,每个样品设2 个平行样,37℃恒温培养箱中培养46 h~47 h后,加入终浓度为50 nmol/L的花萼海绵体诱癌素A (Calyculin A)或终浓度为500 nmol/L的冈田酸(Okadaic acid),继续培养1 h~2 h. 4.2.3 收获细胞 用吸管吹打培养物,转入15 mL刻度离心管中,水平离心机250 g离心10 min,弃上清液,约留1 mL 剩余沉淀物. 4.2.4 低渗 每离心管中加入37℃预温的0.075 mol/L氯化钾(KCl)至8 mL~10 mL,用吸管吹打均匀,置37℃ 低渗10 min~30 min. 4.2.5 预固定 每离心管中加入1 mL~2 mL新配制的固定液 [甲醇/冰乙酸 = 3/1(体积比)],用吸管轻轻吹吸混 匀,250 g离心10 min,弃上清液. 4.2.6 固定 每离心管中加入8 mL固定液,轻轻吹吸混匀,室温固定20 min,250 g离心10 min,弃上清液. 4.2.7 第二次固定 加入8 mL固定液,轻轻吹吸混匀,室温固定15 min,250 g离心10 min,弃去大部分上清液,留适 量上清液. 4.2.8 细胞悬液的制备 用吸管吹打混匀剩余上清液和沉淀,制得细胞悬液. 4.2.9 制片 将2滴~3滴细胞悬液滴在预冷玻片上,过火2 s~3 s,室温自然干燥. 4.2.10 染色 用pH 6.8的磷酸缓冲液将吉姆萨染液(Giemsa)稀释成8%溶液,染色8 min ~10 min,自来水冲洗 后晾干.