PDF《ICS 13.100》

5 早熟染色体凝集环的分析和记录 5.1 光学显微阅片 在光学显微镜的低倍镜(?10倍)下,寻找合适的早熟染色体凝集分裂相;

然后在油镜(?100倍) 下将早熟染色体凝集分裂相调至视野正中间,计数早熟染色体凝集环的数量. WS/T 615―2018

3 5.2 早熟染色体凝集环判定标准及计数标准 早熟染色体凝集环分为空心环和实心环. 空心环是呈中空的圆环形或不规则环形结构. 实心环是呈 实心球状的结构,稍致密,直径大于早熟凝集染色单体的横径.在分析时不计数实心环.早熟染色体凝 集环示例参见附录B. 两条姐妹染色单体排在一起的分裂相称作G2/M期早熟染色体凝集分裂相, 这种分裂相中出现的环称 作G2/M期早熟染色体凝集环.G2/M期早熟染色体凝集分裂相中排在一起的2个大小相近的环状结构,计数1个早熟染色体凝集环.两条染色单体明显处于分开状态的分裂相称作M/A期早熟染色体凝集分裂相, 这种分裂相中出现的环称作M/A期早熟染色体凝集环.M/A期早熟染色体凝集分裂相中的每个环状结构, 计数1个早熟染色体凝集环. 5.3 结果数据的记录和保存 检测到早熟染色体凝集环时, 需要进行拍照. 将选择分析的每一个早熟染色体凝集分裂相记录在早 熟染色体凝集环分析记录表中.早熟染色体凝集环分析记录表参见附录C.

6 剂量-效应曲线的建立 6.1 样品采集 抽取人静脉血6 mL~8 mL,注入肝素抗凝管. 6.2 供血者要求 2名~3名健康成年人,非放射工作者,男女均可,年龄在18岁~60岁,半年内无急慢性疾病、无射 线和化学毒物接触史,近一个月内无病毒感染史. 6.3 照射条件 样品均匀照射;

X或γ射线照射剂量范围在4 Gy~20 Gy;

照射剂量率选择0.3 Gy/min~1 Gy/min, 照射剂量点在6个~8个(均匀布点);

37℃进行照射.照射后将样品置37℃恒温培养箱中修复2 h,然 后进行细胞培养. 6.4 早熟染色体凝集标本制备、分析及记录 早熟染色体凝集标本制备、分析和记录按照第4章~第5章中所述方法进行. 6.5 数据处理 两组间早熟染色体凝集环每细胞数的比较用泊松分布的U检验,多组间早熟染色体凝集环每细胞数 的比较用卡方检验;

早熟染色体凝集环每细胞数与照射剂量的关系进行曲线拟合, 对拟合回归方程进行 假设检验用卡方检验. 6.6 剂量-效应曲线拟合 参照GB/T 28236-2011中4.3, 对X或γ射线诱导的早熟染色体凝集环与受照射剂量之间的剂量-效应 关系以拟合二次多项式为宜,按照式(1)进行拟合: Y = c + ?D + ?D2 1) 式中: Y ―― 早熟染色体凝集环每细胞数;

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4 c ―― 常数项,早熟染色体凝集环每细胞数本底值(PCC环/分裂相);

? ―― 剂量一次项系数;

D ―― 照射剂量,单位为戈瑞(Gy);

? ―― 剂量二次项系数. 6.7 建立剂量-效应曲线 进行剂量估算的实验室应建立剂量-效应曲线;

有条件的实验室可建立不同辐射类型、不同剂量率 的剂量-效应曲线.

7 剂量估算 7.1 早熟染色体凝集标本的制备 所要估算剂量样品的早熟染色体凝集标本制备方法均应与建立剂量-效应曲线的方法相同. 7.2 分析早熟染色体凝集分裂相数的确定 可先分析200个早熟染色体凝集分裂相,将得到的早熟染色体凝集环每细胞数p,代入式(2)计算 出需要分析的分裂相数. n 2) 式中: n ―― 需要分析的分裂相数;