PDF《PS W 22 W》

1 1种有机酸均在

2 1 0n m附 近有较大的吸收, 重复性好, 不受流动相中其他物质的干扰, 故以下实验均采用

2 1 0n m波长进行检测.

3 .

2 流动相浓度的选择 第32卷

2 0

0 4年12月 分析化学 ( F E N X I H U A X U E ) 研究简报 C h i n e s eJ o u r n a l o f A n a l y t i c a l C h e m i s t r y 第12期

1 6

4 5~

1 6

4 8 P S

2 2 P D F ( T r i a l V e r s i o n ) W W W . C C Y T . N E T 将流动相分别配成

0 、

0 .

0 3 、

0 .

0 6 、

0 .

0 9 、

0 .

1 2 、

0 .

1 5 、

0 .

1 8和0.21m o l / L的K2H P O

4 溶液( 用H3P O

4 调pH值为

2 .

6 5 ) , 对标准溶液中的各有机酸进行分离.结果表明: 当流动相中不含有磷酸盐时, 各有机 酸分离效果不好;

逐步增加流动相中磷酸盐的浓度, 有机酸均能得到分离, 且不影响分离效果.由于高 浓度的盐会对泵和柱子的寿命产生影响, 所以本实验选用

0 .

0 1m o l / L的K2HP O

4 作为流动相.

3 .

3 流动相 p H值的选择 以不同 p H值( 用H3P O

4 调节) 的0.01m o l / L的K2H P O

4 溶液作流动相, 测定各有机酸的保留时间, 结果显示流动相 p H值对有机酸的分离影响很大( 见图

1 ) .当pH值为

2 . 0时, 琥珀酸和富马酸完全不 图1流动相 p H对保留时间的影响 F i g .

1 E f f e c t o nr e t e n t i o nt i m e o f o r g a n i ca c i db y p H v a l u eo f m o b i l ep h a s e

1 . 草酸(oxilicacid);

2 . 酒石酸 ( t a r t a r i ca c i d ) ;

3 . 奎 宁酸 ( q u i n i ca c i d ) ;

4 . 苹果酸( m a l i ca c i d );

5 . 莽草酸( s h i k i m i ca c i d ) ;

6 . 抗 坏血 酸( a s c o r b i ca c i d ) ;

7 . 乳酸( l a c t i ca c i d ) ;

8 .乙酸(acetica c i d ) ;

9 . 柠檬酸(citricacid);

1

0 . 富马酸(fumarica c i d ) ;

1

1 . 琥珀酸(succinica c i d ) . 能分开;

逐步提高 p H值,

1 1种有机酸逐渐得到分离, 但柠 檬酸和富马酸、 酒石酸和 奎宁酸的分离度却逐渐减小;

当pH值为

3 . 0时, 柠檬酸和富马酸、 酒石酸和奎宁酸不能有 效分离;

当pH值为

3 . 2时, 部分有机酸的出峰顺序发生变 化.由于 p H值小于

2 . 5的溶液会影响色谱柱的寿命, 经 综合考虑, 最后选择 p H值为

2 . 6磷酸盐缓冲溶液.

3 .

4 流动相中甲醇含量的选择 在流动相中 加入少 量甲 醇, 能有 效的 改善峰 形.以0.01m o l / L的K2H P O 4( p H2 .

6 ) 溶液作流动相, 对不同的 甲醇含量(

0 、

1 %、

2 %、

3 %、

4 %、

5 %) 对色谱分离的影响进 行了比较, 结果表明, 随 着流动相中甲醇含量的增加, 有机 酸的疏水端基与固定相 的相互作用减弱, 保留时间下降,

3 %的甲醇-缓冲溶液( V / V ) 分离度和峰形较好.

3 .

5 其它条件选择 以3%C H 3O H -K 2H P O 4( p H2 .

6 ) 溶液作流动相比较了 柱温、 流速对保留时间的影响. 结果发现: 流速1.0mL/min时, 分离度降低, 柱压升高, 不利于色谱柱的保护和长期使用, 而柱温增 高则会加快传质过程, 缩 小分离度.因此, 选择在室温(

3 0 ℃) 及0.5m L / m i n 流速下进行测定.

3 .

6 分离条件的优化 以 4因素 3水平的正交试验( 流动相 p H值、 甲醇含量、 流速和柱温) 对分离条件进行优化, 以卢佩 章等[8 ] 提出的 H C R F为优化指标, 最终得到优化的条件: (

1 ) 流速

0 . 5m L / m i n ;

(

2 ) 流动相

3 % C H 3O H -