PDF《PS W 22 W》

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2 2 P D F ( T r i a l V e r s i o n ) W W W .

C C Y T . N E T 用于农药残留快速检测的两种酶的比 较 张慧君 许学勤 徐斐* 华泽钊 ( 上海理工大学食品科学与工程研究所, 上海

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0 0

9 3 ) 摘要以商品乙酰胆 碱酯酶( C

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8 9 , V I -S , 从电鳗中提取) 和 自制鸡肝酶 为农药检 测 用酶, 比 较了不同浓 度 的敌敌畏、 敌百虫、 马拉 硫磷和西维因对这两种酶的乙酰胆碱酯酶活力和总酯酶活力 的抑制情况.结果表明, 鸡肝酶的乙酰胆碱酯酶 活力较低, 而其总酯酶活力对 4种农药的灵敏度与商品乙酰胆 碱酯酶活力的灵敏度相 近, 且总酯酶活力对除 马拉硫磷外的其余 3种农药的检出限都较乙酰胆碱酯酶低.同 时对总酯酶活力测定的 p H进行了优化, 发现 p H6 .

5 (

4 0mm o l / L柠檬酸盐缓冲液) 时总酯酶活力较高. 关键词 农药残留, 鸡 肝酶, 乙酰胆碱酯酶活力, 总酯酶活力

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0 3 -

1 2 -

1 1收稿;

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0 4 -

0 6 -

2 5接受 本文 系国家 自然 科学基 金项 目( N o .

5 0

1 7

6 0

3 2 )、 上海市 科委 启 明星 计 划资 助项目 ( N o .

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0 ) 、 上 海市 科 技兴 农 重点 攻 关项 目(No.2001Ⅱ -

4 ) 、 上海 市教 委 青年基 金项 目( N o .

0 2G Q2

1 )

1 引言近年来, 由于果蔬中农药残留超标而引起的中毒事故时有发生, 因此, 快速 检测果蔬中的农药残留 非常重要.目前, 有关快速检测农药残留的报道, 大部分是通过酶抑制法来实现的.所使用的酶主要为 乙酰胆碱酯酶,检测手段是以测定乙酰胆碱酯酶活力被抑制的程度来判断农 药残留是否超标[1] .然而, 这种方法存在一些不足.首先, 所用酶( 乙酰胆碱酯酶) 价格昂贵;

其次, 由于是在体外进行抑制, 某 些农药对乙酰胆碱酯酶的抑制并不明显.因此, 有人认为对此需要附加氧化助剂, 以提高对农药检测的 灵敏度 [ 2] .同时, 有人利用植物来源或动物来源( 肝脏、 血液等) 的酯酶粗酶液, 通过测定总酯酶活力的 抑制程度对有机磷农药和氨基甲酸酯类农药进行检测 [ 2,

3 ] .多数研究结果表 明, 如果没有辅助性氧化 作用, 植物酯酶仅对有机磷类个别农药( 如敌敌畏) 有较明显的的抑制响应 [3 ] . 本实验选择了 4种有代表性的有机磷和氨基甲酸酯类农药, 通过测定乙酰 胆碱酯酶活力和总酯酶 活力, 对从 S i g m a 公司购得的 C

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8 9乙酰胆碱酯酶和实验室自行提取的鸡肝 粗酶液检测这 4种农药的 情况进行了考察, 并对总酯酶活力测定时的最佳 p H进行了优化.

2 实验部分

2 .

1 仪器与试剂 D S - 1型组织捣碎机( 上海标本模型厂) ;

9 0 - 1型离心机( 北京通用离心机厂) ;

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2 S分光光度计( 上 海分析仪器厂) .C

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8 9乙酰胆碱酯酶、 敌敌畏、 马拉硫磷、 敌百虫、 西维因、 α -乙酸萘酯、 二硫代二硝基 苯甲酸( D T N B ) 、 硫代乙酰胆碱( s i g m a 公司) .T r i s 、 氯化钾、 乙二胺四乙酸( E D T A ) 、 固兰 B盐、 柠檬酸 钠、 柠檬酸、 磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠均为国产分析纯试剂.

2 .

2 鸡肝酶粗酶液的制备 将30.0g 新鲜鸡肝与

1 0 0m Lp H7 .

4 ,0 . 1m o l / LT r i s -乙酸缓冲溶液混合, 再加入

2 ,

6 -二叔丁基对 甲酚和甲苯磺酰氟, 使这两种试剂的最终浓度分别为