PDF《黄芪水提物活性成分测定及对 5 种食用菌菌丝体生长的影响》

25 mg 葡萄糖 , 用蒸馏水定容至

250 mL 容量瓶中 , 得到

100 μg/mL的葡萄糖溶液.分别配制成

10、

20、

30、

40、

50、

60、

70、

80、

100 μg/mL的溶液.取上述溶液1 mL加入5%苯酚 0.6 mL, 混匀后快速加入浓硫酸

3 mL, 混匀, 45℃水浴

15 min 后冷却, 在490 nm 处测定吸光 值.绘制总多糖标准曲线. 精密吸取12.5 μL黄芪水提物溶液, 用蒸馏水定容 至5 mL容量瓶中.按照上述步骤测吸光值, 重复3次 并计算总多糖含量. 1.5.5 毛蕊异黄酮苷、 芒柄花苷、 毛蕊异黄酮、 芒柄花素 的含量测定采用C18 色谱柱(250 mm * 4.6 mm,

5 μm), 流动相为乙腈和 0.2%甲酸水溶液, 梯度洗脱 (表1) , 流速为

1 mL/min, 检测波长为

280 nm, 柱温为 30℃, 进样量:

10 μL. 分别称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 芒柄花素葡萄糖 苷、 毛蕊异黄酮和芒柄花素标准品

5 mg, 加甲醇定容 至5mL, 摇匀, 即得浓度为

1 mg/mL 的毛蕊异黄酮葡 萄糖苷、 芒柄花素葡萄糖苷、 毛蕊异黄酮和芒柄花素. 各取上述4种溶液1 mL合并, 摇匀, 得到4种标准品的 混合溶液. 分别吸取4种标准品溶液各10 μL, 注入高效液相 色谱仪, 确定

4 种物质的出峰时间.吸取混合溶液

2、

4、

6、

8、

10 μL 注入高效液相色谱仪分析, 以浓度为横 坐标, 峰面积为纵坐标, 制作混合溶液中4种物质的标 准曲线. 精密吸取黄芪水提物溶液10 μL用高效液相色谱 仪进行分析, 重复

3 次并依据标准曲线计算

4 种成分 含量. 1.6 添加不同浓度黄芪水提物对5种食用菌菌丝体生 长的影响 精密称取黄芪水提物

7 g, 溶于

35 mL 蒸馏水, 备用.在250 mL的锥形瓶中依次添加黄芪水提液

0、

1、

2、

4、

6、

8、

12 mL.将刚配好的PDA培养基趁热分别倒 入上述锥形瓶中加至

80 mL, 配成黄芪水提物浓度为

0、 0.

25、 0.

5、

1、 1.

5、

2、

3 g/100mL 的培养基, 121℃湿热 灭菌

20 min.灭菌结束后趁热倒平板, 每个浓度倒

3 个平板作为重复.冷却放置待培养基水汽基本消失 时, 将活化好菌种斜面取出, 分别接种于培养基上.连 续观察6天, 观察并记录不同浓度黄芪水提物对5种食 用菌菌丝体的生长情况.计算黄芪水提物对5种食用 菌菌丝生长抑制率, 计算见公式(1). 时间/min

0 15

25 30

40 50

55 65 乙腈/%

15 20

25 25

37 37

46 15 0.2%甲酸水/%

85 80

75 75

63 63

54 85 表1 流动相梯度 张劲松等: 黄芪水提物活性成分测定及对

5 种食用菌菌丝体生长的影响 ・ ・

45 中国农学通报 http://www.casb.org.cn 菌丝生长抑制率 = 对照组菌落半径 - 实验组菌落半径 对照组菌落半径 * 100% (1) 1.7 数据处理 实验数据使用 SPSS Statistics 17.0 软件进行单因 素方差分析, 然后使用 Duncan'

s 多重比较, 检验各个 处理数据间的差异显著性.

2 结果与分析 2.1 黄芪水提物的制备 经过提取最终得到黄芪水提物32.09±1.56 g, 得率 为32.09%, 粉末均匀呈淡黄色, 有黄芪味, 易潮. 2.2 标准曲线的制备及黄芪水提........