PDF《朝阳科技大学 生化科技研究所》

第一章 绪论.1 1-1 前言.1 1-2 文献回顾.3 1-2-1 黑菌素的介绍

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第二章 毛细管电泳简介与黑菌素之分析.33 2-1 毛细管电泳简介与背景.33 2-1-1 毛细管电泳之简介

33 2-1-2 毛细管电泳应用

35 2-2 电泳与电渗透流.36 2-3 毛细管电泳之各种分离模式.40 2-3-2 毛细管电泳对於蛋白质、胜肽之应用

44 2-3-3 毛细管电泳对於醣类之应用

44 V 2-3-4 毛细管电泳对於生物碱、酚酸类化合物之应用

45 2-3-5 毛细管电泳对於维生素、有机酸之应用

45 2-4 黑菌素之毛细管电泳定量分析.47 2-4-1 材料与方法.47 2-4-2 菌种与菌种保存

48 2-5 结果与讨论.50

第三章 黑菌素之分离纯化.55 3-1 前言.55 3-2 材料与方法.56 3-2-1 发酵程序.56 3-2-2 萃取.56 3-2-3 仪器与设备.56 3-3 结果与讨论.59

第四章 结论与展望.70 参考文献.73 作者简历.87 VI 图目录 图目录 图目录 图目录 图1-1 黑菌素 B (11)由十字花科叶片代谢的可能代谢途径.14 图1-2 大蜡螟幼虫与 DE (30)一起培养时可能的代谢途径

16 图2-1 毛细管电泳原理.37 图2-2 毛细管区带电泳和高效能液相层析的流动分布

39 图2-3 CZE 机制分离图.41 图2-4 MEKC 机制分离图.43 图2-5 不同缓冲溶液浓度下分析黑菌素之层析图谱

52 图2-6-1 不同 pH 值下分析黑菌素之层析图谱.53 图2-6-2 不同 pH 值下分析黑菌素之层析图谱.54 图3-1 半制备型 HPLC 层析图谱图 3-2 黑菌素 B 之检量线.61 图3-2 黑菌素 B 之检量线.62 图3-3 分离纯化后 DB 在CE 之层析图谱.63 图3-4 黑菌素 E 之检量线.64 图3-5 分离纯化后 DE 在CE 之层析图谱.65 图3-6 黑菌素 B ESI-MS 图谱.67 图3-7 黑菌素 B ESI-MS/MS 之特性图谱.68 图3-8 黑菌素 B ESI-MS/MS 特性图谱之解说图.69 VII 表目录 表目录 表目录 表目录 表1-1 黑菌素的共通结构和已知的黑菌素

7 表1-2 黑菌素定性和定量分析方法总结

12 表1-3 黑菌之黑菌素致病性的指标

23 表2-1 电渗流(Electroosmotic flow, EOF)之变因.38 表3-1 毛细管电泳对於黑菌素之侦测极限及定量极限

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第一章

第一章

第一章

第一章 绪论 绪论 绪论 绪论 1-1 前言 前言 前言 前言 微生物的应用围相当广泛,传统上微生物在酒类酿造、食品w酵和 污水处理等方面都扮演重要角色.随著科技发展的脚步,许多由微生物生 产的产品也被一一开发,其中包含了医药品、农业用品、特用品和食品添 加剂等等,因此微生物的发展对於人类来说是相当具有重要性的. 黑菌素(Destruxins)是由α-羟基酸及五个胺基酸残基组成.事实上是 由环缩酚酸胜肽加上天然环胜肽,合并成具有一个以上酯键连结的特色之 天然产物大家族.这一类天然产物,因其表现出的多样化生物活性而在科 学界引起广大兴趣,包括抗癌、抗生素、抗真菌、免疫抑制剂或抗发炎活 性(Sarabia et al., 2004),因此黑菌素为一具有发展潜力之生物活性物质. 黑菌素属於环状缩酚酸胜肽系列,应用方面如杀虫、细胞毒性、抗 病毒、免疫抑制剂及植物毒性等(Pedras et al., 2002;

Sowjanya Sree et al., 2008).黑菌素也诱发各种生物效应,对於哺乳动物白血病细胞与脾脏淋 巴细胞也有毒性(Morel et al., 1983;

Odier et al., 1992;

Pedras et al., 2002;

Skrobek and Butt, 2005),并已证实对小鼠肿瘤具有体外抗增殖活性(Odier et

2 la., 1992).黑菌素的特性已被从事相关研究的科学家所重视,因此如何以 快速、方便及低污染的检测方法来定性、定量黑菌素是本实验的重点目 标.