PDF《产品说明书》

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5 US EVERBRIGHT? INC.

技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com 产品说明书产品名称:Fast Super EvaGreen ? qPCR Master Mix 产品货号:S2008 产品规格:100T,500T 产品内容 组分 100T 500T A. A.

2 * Super EvaGreen Master Mix

1 mL 5*

1 mL B.

10 *ROX reference dye 0.5 mL

1 mL 组分 A 包含 Super EvaGreen ? dye,dNTP,PCR buffer(含Tris 和MgCl2) , 热启动 Taq 聚合酶;

组分 B 是10 * ROX 参 照物. 产品参数 λabs/λem = 500/530 nm (结合 DNA) λabs =

471 nm (未结合 DNA) 储存条件 本产品-20℃避光保存,推荐条件下至少可以储存

6 个 月以上.使用前,将产品室温下解冻,并轻轻涡旋混匀,解 冻后所有实验应在冰上操作.使用后,该产品可以重新冷冻 储存. 产品介绍 Fast Super EvaGreen ? qPCR Master Mix 是一款用于实 时定量 PCR 的即用型试剂盒. 其中 Super EvaGreen ? 是一种 新型的专门为 qPCR 和高分辨率溶解曲线分析设计的 DNA 结合染料,它通过一种 按需求释放 的机制,极大地降低了 对PCR 扩增的抑制性. Fast Super EvaGreen ? qPCR Master Mix 包含一种化学 修饰的热启动 Taq DNA 多聚酶.这种 Taq 酶2min 内可以 被完全激活,尤其适用于快速 PCR 反应.此外,这种 Taq DNA 多聚酶在室温下没有活性, 不会对 DNA 造成污染, 性 能远远优于市面上抗体修饰的热启动酶. Super EvaGreen ? 的另一个优点是它的安全性.常规的 DNA 结合染料存在潜在的致突变性.基于这方面考虑,我 们研发设计了 Super EvaGreen ? 染料,它不能透过细胞膜, 因而不能与活细胞的基因组 DNA 结合,确保了其安全性. 然而,其他所有的商业性 PCR 荧光染料都可以在几分钟内 进入细胞,例如 SYBR Green I,是一种众所周知的环境毒 性比溴化乙锭(EB)还要大的诱变剂. 此外, 我们公司的 Super EvaGreen ? Master Mix 还有一 个性能也十分卓越,即它的 PCR 产物可以直接用于凝胶电 泳检测,不需要额外添加任何核酸染料.试剂盒中的 Super EvaGreen 可以作为 DNA 预染的核酸染料, 电泳后可以直接 用于观察 DNA 条带. 使用方法 一. 实验参考因素 1. qPCR 仪器:对于 iCycler 的用户,不需要在 PCR Mix 里 面额外添加 FAM.由于 EvaGreen ? 有轻微的背景荧光,它 可以作为充足且稳定的校准基线来使用.对于 Roche Light Cycler 的用户,如果使用玻璃毛细管进行反应,那么需要在 反应体系中额外加入 BSA(终浓度 ~0.5 mg/mL) ;

如果使 用透明的塑料毛细管,则不需要添加 BSA. 2. 溶解曲线分析仪器:Rotor-Gene 6000, ABI

7500 FAST, HR1?, 384-well LightScanner?, Roche LightCycler 480, Rotor-Gene 6000, ABI

7500 FAST 和Roche LightCycler

480 等仪器都可以用于 qPCR 和溶解曲线的分析. 具体参照仪器

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5 US EVERBRIGHT? INC. 技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com 生产商的使用说明进行数据的采集和分析操作. 3. ΔR 和ΔRN: 当比较众多 qPCR Master Mix 产生的荧光信 号强度时,需要注意比较的方法.通常 ΔR 是高于基线水平 的荧光增量.一般来说,10 μL 的1* Fast Super EvaGreen ? 反应体系与

50 μL ABI 公司的 1* PowerSYBR 或Invitrogen 公司的 1* SYBR Green I 相比,可以产生更高的 ΔR.ΔRN 定义为 ΔR 除以 ROX 值. 因此高浓度的 ROX 可以产生更低 的ΔRN.当ROX 被ABI 7500, iCycler IQ, MJ opticon, MJ Chromo4, MX3000 或MX4000 仪器最大激发时,ΔRN 会更 小.因此,应用于商业 SYBR Green Master Mix 的较低浓度 的ROX 往往会产生更高的 ΔRN. 4. 预期的动力学曲线:根据对比实验我们发现,Fast Super EvaGreen ? Master Mix 的PCR 扩增曲线与 SYBR Green I 的Master Mix 相比,其灵敏度和稳定性更高.由于 SYBR 染 料对 DNA 扩增的抑制性影响,基于 SYBR 染料的 Master Mix 在PCR 达到 Ct 阈值后通常会延迟扩增 5-7 个循环数. 相比较而言,Fast Super EvaGreen ? Master Mix 可以使 PCR 持续扩增至