DOC《附件1》

编号PM22~PM42为II组,每组包含21对引物. 5.3.2品种真实性验证强调的是对结果的否定,相对而言对引物数量要求不高,检测允许采用序贯方式.先采用I组引物进行检测,若未检测到或检测到可以判定不符结果的差异位点数的,可终止检测.对于采用I组引物进行检测,若检测到而未达到可以判定不符结果的差异位点数的,则继续完成II组引物的检测. 5.3.3 品种真实性身份鉴定强调的是对结果的肯定,在已具备已知审定品种的SSR指纹数据比对平台的前提下,通过已知检测信息能够筛查确定至具体品种,为尽量降低误判,检测时会对引物数量要求较高,可采用序贯方式,也可直接采用表1的42对SSR引物进行检测,直至与SSR指纹数据比对平台比较后能够确定为止.经比较后仍与已知品种存在没有位点差异而无法得出结论的,允许采用其他能够区分的SSR分子标记进行检测. 样品 5.4.1 送验样品为种子,重量应不低于100g或不少于2000粒.在种子生产基地取样,送验样品可为麦穗,数量应不低于20个麦穗(分别来自不同个体). 在种子生产基地取样,送验样品可以为幼苗、叶片等组织或器官,这时注意其检测比对对象.幼苗、叶片的数量至少含有20个个体,采用混合样品检测的先单独提取DNA,再取等量DNA混合. 5.4.2 从送验样品中分取有代表性的试样,采用混合样或单个个体进行检测.混合样试样来源应至少含有20个个体,单个个体试样应至少含有20个个体. 5.5 检测条件 真实性鉴定应在有利于检测正确实施的控制条件下进行,包括但不限于下列条件: 种子检验员具备熟悉所使用检测技术的知识和技能;

所有仪器与使用的技术相适应,并已经过定期维护、验证和校准;

使用适当等级的试剂和灭菌处理的耗材;

使用校准影响检测结果评定的适宜参照样品.

6 仪器设备、试剂和溶液配制 仪器设备 6.1.1 DNA提取 高速冷冻离心机、水浴锅或金属浴、紫外分光光度计或核酸浓度测定仪、组织研磨仪. PCR扩增 PCR扩增仪或水浴PCR扩增装置. 电泳 6.1.3.1 毛细管电泳 DNA分析仪. 变性PAGE垂直板电泳 高压电泳仪、垂直板电泳槽及制胶附件、胶片观察灯、凝胶成像系统或数码相机. 其它器具 微量移液器、电子天平、高压灭菌锅、加热磁力搅拌器、微波炉、冰箱、染色盒. 试剂 DNA提取 CTAB、三氯甲烷、异戊醇、异........