DOC《附件1》

二、兽药使用调查 各监测任务承担单位要认真做好饲料和饲料药物添加剂来源与种类调查、采样前动物使用抗菌药物情况调查(预防用药和治疗用药)和采集样品的统计,据实填写采样记录表.

三、细菌分离与鉴定 采用选择性培养基,定向做大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和弯曲杆菌分离,用生化试验、PCR技术或血清学方法对分离物进行鉴定.本年度分离监测的细菌种类与数量要求见《监测计划》.分离到的菌株在-20℃以下加甘油保护剂冷冻保存或用其它合适方法自行保存,沙门氏菌和弯曲杆菌送中国兽医药品监察所进行血清型鉴定后保存.

四、药物敏感性测定 采用经中国兽医药品监察所质量认定的药敏试验板进行药物敏感性检测.目前,已实施质量认定的药敏板生产企业有:天津市金章科技发展有限公司和上海星百生物技术有限公司. 检测用质控菌株由中国兽医药品监察所统一供应.

五、结果报送 由中国兽医药品监察所将本年度总结任务分配到各监测任务承担单位.各单位需在11月25日之前完成,并将电子版总结报送中国兽医药品监察所.由中国兽医药品监察所汇总,在12月31日前报送农业部兽医局. 附件3 采样记录表 采样地:养殖场: 采样时间:联系人姓名、

电话: 样品来源 猪 日龄 ____ 鸡 日龄 ____ 牛 日龄 ____ 其他________日龄 ____ 消化道 呼吸道 泌尿生殖道 肝胆 脑 淋巴结 关节 奶样 皮肤 粪便 其他_ 采样动物健康状况 养殖量 健康 发病及症状: . 采样养殖场使用抗菌药情况 饲料来源、添加抗菌药种类 治疗用抗菌药种类与使用方式 生产厂名称 饲料添加的药物名称 剂量 使用时间 药物名称 使用方式 剂量 单个动物剂量 饮水添加剂量 饲料添加剂量 用药天数 样品分离菌株 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 肠球菌 沙门氏菌 空肠弯曲杆菌 其他_菌株编号: 注:菌株编号按照 菌种、来源-采样地、采样年月-菌株编号 的格式进行.如EB-L0701-0001,其中:E(大肠杆菌)B(牛)L(鲁)07(年)01(月)-0001(菌株编号). 菌种简写建议为:E(大肠杆菌)、S(沙门氏菌)、SA(金黄色葡萄球菌)、ECi(肠球菌)、CJ(空肠弯曲杆菌)、CC(结肠弯曲杆菌) 动物简写建议为:B(牛)、P(猪)、C(鸡) 注:a为喂奶猪或保温鸡,b为保育猪或生长鸡,c为育成猪或鸡,d为种母猪或产蛋鸡. 附件4 动物源细菌分离和鉴定方法

一、动物源大肠杆菌的分离与鉴定 范围 本方法规定了用于动物源大肠杆菌分离与鉴定的方法. 本方法适用于各种动物中大肠杆菌的分离与鉴定.

2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其它设备和材料如下. 2.1 冰箱:2-4℃和-20℃. 2.2 恒温培养箱:36±1℃. 2.3 电子天平:感量0.1g. 2.4 显微镜:10*~100*. 2.5 生物安全柜. 2.6 生化鉴定卡或商品化试纸条. 2.7 采样管或商品化采样棉拭子. 2.8 微量加样器:1μL~1000μL. 2.9 吸头(与微量加样器匹配).

3 培养基和试剂 3.1 运送培养基. 3.2 麦康凯琼脂. 3.3 大肠杆菌阳性血清.

4 大肠杆菌分离与鉴定程序 大肠杆菌分离与鉴定程序见图1. 图1:大肠杆菌分离与鉴定程序 5.操作步骤 5.1 采样 选择养殖场或屠宰场,灭菌棉拭子采集动物肛门或泄殖腔样品,置入运送培养基中,保存时间不超过48小时. 5.2 大肠杆菌的分离 5.2.1 拭子接种于麦康凯琼脂平板,36±1℃培养18-24h;