PDF《吴茱萸 、甘草浸提液对亚硝化反应清除 及阻断作用的对比研究》

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6 ] . 鉴于吴茱萸、 甘草这两味中药中皆含有能防 癌抗癌的黄酮类化合物, 本试验进一步通过体外 模拟人体胃液的条件, 探讨天然吴茱萸、 甘草浸提 液抑制亚硝化反 应活性物质的最佳浸提工艺条 件, 研究和对比吴茱萸、 甘草浸提液清除亚硝酸盐 以及阻断 N - 亚硝基化合物的合成的效果, 为吴茱 萸、 甘草的合理利用提供一定的科学依据, 同时为 张 成等:吴茱萸、 甘草浸提液对亚硝化反应清除及阻断作用的对比研究

6 9 研究开发亚硝化反应抑制剂提供参考.

1 材料与方法

1 .

1 原料与试剂 吴茱萸、 甘草: 珠海市北京师 范大学珠海分校药店购买的中药吴茱萸、 甘草, 放 置实验室密封储藏备用. 无水乙醇;

柠檬酸钠 - 盐酸缓冲液( 自制) ;

亚 硝酸钠;

二甲胺溶液;

碳酸钠;

α - 萘胺;

对氨基苯磺 酸;

N -

1 - 萘乙二胺盐酸盐;

聚酰胺粉1

0 0~2

0 0目 等试剂均为分析纯.

1 .

2 主要仪器 UV

7 5 2型紫外可见分光光度计 ( P h e n i x凤凰) ;

Z F - I三用型紫外分析仪( 上海顾 村电光仪器厂) ;

E P E D - T / D 型实 验室级超纯水器( 南京易普易达科技发展有限公司) ;

F A

1 0

0 4 B 型电 子天平(上海越平科学仪器有限公司);

HWS

2 4型电热恒温水浴锅( 上海一恒科技有限 公司) ;

P B -

1 0型pH精密酸度计( 赛多利斯科学 仪器( 北京) 有限公司) .

1 .

3 实验方法

1 .

3 .

1 浸提方法 将购买的吴茱萸、 甘草取出称 量, 随后按照一定的料液比, 以一定浓度的乙醇水 溶液在特定温度下浸提特定时间, 冷却至室温后 经聚酰胺粉过滤, 得浸提液, 保存于棕色瓶备用.

1 .

3 .

2 最佳浸提条件 为了系统考察吴茱萸、 甘 草浸提液分别对亚硝酸钠的清除作用以及对 N - 亚硝基化合物合成的阻断作用的最佳浸提工艺条 件, 选用了 L 9(

3 3 ) 正交表进行试验.分别以对亚 硝酸钠清除率和 N - 亚硝基化合物合成的阻断率 作为考察指标, 共得到3 6个浸提液样品, 从而确 定各自作为考察指标时的最佳浸提工艺条件.

1 .

3 .

3 亚硝酸盐清除率的测定 基本原理: 亚硝 酸盐在弱酸性的条件下, 能与氨基苯磺酸重氮化 后, 再与 N -

1 - 萘乙二胺盐酸盐偶合生成红色化合 物[

7 - 8] . 分别取吴茱萸、 甘草浸提液5.0mL于25mL比色管中, 加入1

2 . 5m Lp H=3 .

0 的柠檬酸 钠盐酸缓冲液, 再加入

1 0

0 m g ・ k g -1 N a NO

2 溶液2.5m L, 用蒸馏水定容至刻度,

3 7℃恒温1h, 然后各吸取1 .

0 m L 反应液于小试管中, 加入 w =0 . 4%对氨基苯磺酸溶液

2 .

0 m L,w=0 . 2% N -

1 - 萘乙二胺盐酸盐溶液2 .

0 m L, 摇匀放置

1 5 m i n后, 用紫外-可见分光光度计在波长为540nm处测吸光度值, 分别用相应浓度相同用量的 浸提剂作空白对照, 最后计算清除率Yc. Yc=( A0-Ax) / A0 式中 A0 为加入相应浸提剂空白实验的吸光度值;

Ax 为加入不同浓度浸提液时的吸光度值. 按上述方法, 另分别取最佳浸提工艺条件下 获得的 吴茱萸、 甘草浸提液0.

5、

1 .

0、

1 .

5、

2 .

0、

2 .

5、

3 .

0、

3 .

5、

4 .

0、

4 .

5、

5 .

0 m L 进行亚硝酸盐清 除率的浓度梯度测定, 计算每一浓度下的清除率.

1 .

3 .

4 N - 亚硝基化合物合成阻断率的测定 在 模拟 人体胃液的条件下, 二甲胺与亚硝酸钠在pH3.0,