DOC《附件1》

3、可待因-D3的浓度均为5.0 ?g/mL的内标工作溶液.此溶液密封后4℃避光保存,有效期 6个月. 3.4.5标准工作溶液的配制:分别准确吸取混合标准中间溶液(2)(3.4.3)0 ?L、10 ?L、20 ?L、40 ?L、100 ?L、200 ?L、400 ?L于20 mL容量瓶中,再分别准确加入同位素内标工作溶液(5.0 ?g/mL)(3.4.4)80 ?L,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,摇匀,得罂粟碱、那可丁、蒂巴因浓度为

0 ng/mL、0.05 ng/mL、0.10 ng/mL、0.20 ng/mL、0.50 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL,吗啡、可待因浓度为0 ng/mL、2.5 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的系列标准工作溶液,内标溶液浓度为20 ng/mL.临用新配. 3.5 微孔滤膜:孔径为0.22 ?m有机相型微孔滤膜.

4 仪器和设备 4.1 液相色谱-三重四极杆串联质谱仪:带电喷雾离子源(ESI). 4.2 分析天平:感量为0.00001 g. 4.3 分析天平:感量为0.01 g. 4.4 离心机:转速≥4

000 r/min. 4.5 超声波清洗器:功率为800W. 4.6 涡旋混合器. 4.7 匀浆机. 4.8 粉碎机.

5 试样制备和保存 取所有待测液体样品(>

50 g),置玻璃烧杯中,搅匀.取所有待测半固体样品(>

50 g),置塑料杯中,匀浆混匀.取所有待测固体样品(>

50 g),置粉碎机中粉碎混匀. 混匀好的样品分成两份,分别作为试样(>

20 g)和留样(>

20 g),装于洁净聚四氟乙烯离心管中,密封并标记,于18℃保存.

6 试样处理 称取2 g试样(精确至0.01 g)于50 mL聚四氟乙烯具塞离心管中,加入60 ?L同位素内标工作溶液(5.0 ?g/mL)(3.4.4),液体样品、半固体样品加入1~3 mL水,固体样品加入5 mL盐酸溶液(3.2.1).再分别涡旋振荡30 s,准确加入15 mL乙腈(3.1.2),密塞,涡旋振荡1 min,超声处理30 min,取出,加入6 g无水硫酸镁(3.1.7)和1.5 g无水醋酸钠(3.1.6)的混合粉末(或以相当的市售商品代替),立即涡旋振荡2 min,使吸附样品中的全部水分,以4000 r/min离心5 min,取上清液,以0.22 ?m滤膜(3.5)过滤.取续滤液适量,进样,用于测定吗啡、可待因;

准确量取续滤液1 mL至20 mL量瓶中,用乙腈(3.1.2)稀释至刻度,摇匀,进样,用于测定罂粟碱、那可丁、蒂巴因.

7 测定 7.1 参考液相色谱条件 7.1.1 色谱柱:BEH HILIC柱(粒径1.7 ?m,2.1 mm*100 mm),或性能相当者;

7.1.2 进样量:5 ?L;

7.1.3 柱温:室温;

7.1.4 流速:0.3 mL/min;

7.1.5 流动相:A相:甲酸乙腈溶液(0.1%)(3.2.4),B相:含0.1 %甲酸的10 mmol/L甲酸铵溶液(3.2.5),按表2进行梯度洗脱. 表2 梯度洗脱程序 时间/min A相/% B相/% 0.00

95 5 1.00

95 5 6.00

85 15 6.50

60 40 8.00

60 40 8.10

95 5 12.00

95 5 7.2 参考质谱条件 7.2.1 离子化方式:电喷雾电离;

7.2.2扫描方式:正离子扫描;

7.2.3 检测方式:多反应监测(MRM);

雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气;

使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求,参考条件见附录A. 7.3 定性测定 在相同实验条件下测定标准溶液和样品溶液,若样品溶液中检出色谱峰的保留时间与相应标准溶液色谱峰的保留时间一致,且样品溶液的质谱离子对相对丰度与浓度相当标准溶液的质谱离子对相对丰度相比较,相对离子丰度(k)的相对偏差不超过表3规定的范围,则可判定样品中存在该组分. 表3 定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% k>

50 50≥k>

20 20≥k>

10 k≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 7.4 定量测定 取标准工作溶液进样,以罂粟碱、那可丁和蒂巴因的色谱峰面积为纵坐标,罂粟碱、那可丁和蒂巴因的浓度为横坐标绘制标准工作曲线,外标法定量;