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附件: 《中国药典》2015年版(三部)血液制品拟增修订内容 目录:

一、 各论品种拟增修订项目及内容

二、 拟增订通则

3428 人免疫球蛋白类制品IgA残留量测定法

三、 拟增订品种:猪纤维蛋白粘合剂

一、各论品种拟增修订项目及内容 序号 品种名称 《中国药典》2015年版 三部内容 拟增修订内容

1 静注乙型肝炎人免疫球蛋白(pH4) 无3.

3.12 IgA残留量 应为批准的要求(通则3428).

2 冻干静注乙型肝炎人免疫球蛋白(pH4) 无3.3.12 IgA残留量 应为批准的要求(通则3428).

3 静注人免疫球蛋白(pH4) 无3.3.12 IgA残留量 应为批准的要求(通则3428).

4 冻干静注人免疫球蛋白(pH4) 无3.3.12 IgA残留量 应为批准的要求(通则3428).

二、

3428 人免疫球蛋白类制品IgA残留量测定法 本法用于测定人免疫球蛋白类制品中IgA残留量,包括紫外-可见分光光度法、酶联免疫法和散射比浊法.首次采用本法检测供试品中IgA残留量时,应根据不同样品基质及IgA残留量的水平选择适宜的测定方法并做相应方法学验证.紫外-可见分光光度法和酶联免疫法中IgA残留量的效价单位可根据标准品标签说明换算成质量单位. 第一法 紫外-可见分光光度法(仲裁法) 本法系依据免疫球蛋白A (IgA) 与相应的抗体特异性结合后,在适宜的电解质、温度、pH条件下,产生凝集反应,形成抗原-抗体复合物,用比浊法测定供试品中IgA的残留量. 试剂(1)缓冲液 称取三羟甲基氨基甲烷(Tris) 12.42 g 、氯化钠9g、聚乙二醇6000 50g、牛血[白蛋白(BSA) lg、叠氮化钠(NaN3) l g,加水适量使溶解,用lmol/L盐酸溶液调节pH 值至7.4,用水稀释至1000ml.如缓冲液中不添加叠氮化钠,应临用新制. (2)抗人IgA血清 取抗人IgA血清(应为全血清经过一定纯化技术分离制得的特异性抗体)适量,加缓冲液稀释至抗体最终效价为1 :

4 (例如抗人IgA血清效价为1:100,量取原液2ml加抗体缓冲液48ml),充分混匀,0.45μm滤膜滤过,作为工作抗体液,4°C保存备用. IgA标准品溶液的制备 按IgA标准品使用说明书加水复溶,精密量取适量,用0.9%氯化钠溶液定量稀释制成每1ml中含IgA25 IU、12.5 IU、6.25 IU、3.125 IU、1.5625IU的溶液. 供试品溶液的制备 取供试品原液或将供试品用0.9%氯化钠溶液定量稀释制成适当浓度,作为供试品溶液,使其IgA残留量在标准曲线范围内. 测定法 分别取IgA标准品溶液和供试品溶液各10μl,加入已预热至37℃的工作抗体液lml,混匀,平行做2 管,置37℃水浴中保温1小时,放冷,充分混匀,照紫外-可见分光光度法(通则0401),立即在波长340nm处分别测定吸光度(全部反应管自水浴中取出后必须在10分钟内测量完毕).同时以0.9%氯化钠溶液10μl替代供试品溶液,同法操作,作为空白对照. 计算标准品和供试品溶液吸光度的均值.以标准品溶液IgA含量的对数对其相应的吸光度的对数作直线回归,求得直线回归方程,相关系数应不低于0.99;

将供试品溶液吸光度的对数值代入直线回归方程,求得值的反对数,再乘以稀释倍数,即得供试品中IgA残留量. 第二法 酶联免疫法 本法系采用酶联免疫法测定供试品中IgA残留量. 试剂 按经验证的人IgA酶联免疫试剂盒说明书配制试剂. 标准品溶液的制备 取IgA标准品,加适量水复溶,用试剂盒中稀释液将复溶后标准品在每1ml含0.625*10-3~10*10-3IU范围内做适当的系列稀释(通常做5个稀释度). 供试品溶液的制备 取供试品适量,用试剂盒中稀释液定量稀释制成适当浓度,使其IgA含量在标准曲线范围内. 测定法 按试剂盒说明书进行,分别设置1孔底物空白对照和稀释液对照,标准品溶液及供试品溶液均做双孔平行测定.试剂盒底物空白对照和稀释液对照的吸光度应在试剂盒要求范围内,试验有效.以标准品溶液的IgA含量的对数对其相应的吸光度的对数作直线回归,求得直线回归方程,相关系数应不低于0.99;