DOC《实验常用试剂、缓冲液的配制方法》

实验常用试剂、缓冲液的配制方法

1、1M Tris-HCl?组份浓度

1 M Tris-HCl (pH7.

4,7.6,8.0)???配制量 1L ????配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中. 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解. 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值. pH值?浓HCl? 7.4?约70mL 7.6?约60mL 8.0?约42mL 4. 将溶解定容至1L.? 5. 高温高压灭菌后,室温保存. 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位.?

2、1.5 M Tris-HCl????组份浓度 1.5 M Tris-HCl ??? (pH8.8)配制量 1L ????????配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中. 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解. 3. 用浓盐酸调pH值至8.8. 4. 将溶液定容至1L. 5. 高温高压灭菌后,室温保存.? ?????? 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位.?

3、10*TE Buffer??????? 组份浓度

100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA (pH 7.4,7.6,8.0) ?配制量 1L ?配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中.

1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mL

500 mM EDTA(pH8.0) 20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合. 3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌. 4. 室温保存.

4、3 M 醋酸钠?????组份浓度

3 M 醋酸钠 ??? (pH5.2)配制量 100mL ??? 配置方法 1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解. 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2. 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL. 4. 高温高压灭菌后,室温保存.

5、PBS Buffer?组份浓度

137 mM NaCl,2.7mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4 配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中. NaCl?8 g KCl?0.2g Na2HPO4?1.42 g KH2PO4?0.27g ???????2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解. ????? 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L.? ???????4. 高温高压灭菌后,室温保存. ?????? 注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2.

6、10 M醋酸铵?组份浓度

10 M醋酸铵 配制量 100mL ?? 配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100~200 mL烧杯中,加入约30 mL的去离子水搅拌溶解. 2.加去离子水将溶液定容至100mL. 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌. 4.密封瓶口于室温保存.? ???????注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌.

7、Tris- HCl平衡苯酚??? 配置方法 ???????1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验.但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用.同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等.因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验.?? ?????? 2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等.所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇.? ???????3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:? 液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态.从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解.? 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%.该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色.有助于方便识别有机相.? 加入等体积的1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相.?? 重复操作步骤③.? 加入等体积的0.1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相.?? 重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相.? 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8.? 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存.