编辑: 达达恰西瓜 | 2019-07-04 |
8、苯酚/氯仿/异戊醇??配置方法 ??????? 1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇(25:24:1).氯仿可使蛋白(25 :24 :1) 质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡.? ??????? 2. 配置方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存.?
9、10%(W/V)SDS???组份浓度 10%(W/V)SDS 配制量 100mL ????配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解. 2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2. 3. 将溶液定容至100mL后,室温保存.
10、2 N NaOH?组份浓度 2N NaOH 配制量 100mL? ????配置方法 1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂).? ??????2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌. ???? 3. 待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL. ?????4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存.
11、2.5 N HCl?组份浓度 2.5 N HCl 配制量 100mL ????配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸(11.6N),均匀混合. 2. 室温保存.
12、5 M NaCl?组份浓度
5 M NaCl 配制量 1L ??配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水后搅拌溶解. 2. 加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份. 3. 高温高压灭菌后,4℃保存.
13、20%(W/V)Glucose??? ?组份浓度 20%(W/V)Glucose? 配制量 100mL? ?配置方法 1. 称取20g Glucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解. 2. 加去离子水将溶液定容至100mL. 3. 高温高压灭菌后,4℃保存.
14、Solution I?组份浓度
25 mM Tris-HCl(pH8.0),10mM EDTA,50mM Glucose (质粒提取用)配制量 1L ????配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中. 1M Tris-HCl(pH8.0)25mL 0.5 M EDTA(pH8.0)20mL? 20%Glucose(1.11M)45mL dH2O?910mL 2. 高温高压灭菌后,4℃保存. 3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A(20mg/mL).
15、Solution II?组份浓度 250mM NaOH,1%(W/V)SDS (质粒提取用)配制量 500mL ???配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中. 10%SDS?50mL 2N NaOH?50mL? 2. 加灭菌水定容至500mL,充分混匀. 3. 室温保存.此溶液保存时间最好不要超过一个月.? 注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌.
16、Solution III?组份浓度 3M KOAc,5M CH3COOH (质粒提取用)配制量 500mL ?配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中. KOAc?147g CH3COOH?57.5mL? 2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解. 3. 加去离子水将溶液定容至500mL.? 4. 高温高压灭菌后,4℃保存.
17、0.5M EDTA?组份浓度 0.5 M EDTA ?????? (pH8.0)配制量 1L ?????配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA?2H2O,置于1L烧杯中. 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌. 3. 用NaOH调节pH值值8.0(约20g NaOH).? 注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解. 4. 加去离子水将溶液定容至1L. 5. 适量分成小份后,高温高压灭菌. 6. 室温保存.
18、1 M DTT?组份浓度
1 M DTT 配制量 20mL 配置方法 1. 称取3.09g DTT,加入到50mL塑料离心管内. 2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌. 3. 适量分成小份后,-20℃保存.
19、10mM ATP?组份浓度 10mM ATP 配制量 20mL 配置方法 1. 称取121mg Na2ATP?3H2O,加入到50mL塑料离心管内. 2. 加20mL的25mM Tris-HCl(pH8.0),搅拌溶解. 3. 适量分成小份,-20℃保存. 分子生物学实验常用培养基的配制方法