DOC《实验常用试剂、缓冲液的配制方法》

1、Ampicillin?组份浓度 100mg/ml Ampicillin (100mg/ml)配制量 50mL ?配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中. 2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL. 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌. 4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存.

2、IPTG?组份浓度 24mg/mL IPTG (24mg/mL)配制量 50mL ?????配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中. 2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL. 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌.? 4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存.

3、X- Gal?组份浓度 20mg/mL X- Gal (20mg/mL)配制量 50mL 配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中. 2. 加入40mL DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL. 3. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存.

4、LB培养基?组份浓度 1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,1%(W/V)NaCl 配制量 1L ?????? 配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中 Tryptone?10g Yeast Extract?5g? NaCl?10g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解. 3. 滴加5N NaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0. 4. 高温高压灭菌后,4℃保存.

5、LB/Amp培养基?????组份浓度 ?1%(W/V)Tryptone 0.5%(W/V)? ?? Yeast Extract 1%(W/V)NaCl 0.1mg/mL?Ampicillin 配制量 1L ????????配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中 Tryptone?10g Yeast Extract?5g NaCl?10g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解. 3. 滴加5N NaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0. 4. 加去离子水将培养基定容至1L.? 5. 高温高压灭菌后,冷却至室温. 6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)后均匀混合. 7. 4℃保存.

6、TB培养基?组份浓度???? 1.2%(W/V)???? ? Tryptone 2.4%(W/V)?? ?? Yeast Extract 0.4%(V/V)Glycerol? 17mM?KH2PO4 72mM?K2HPO4? 配制量 1L ????? 配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL. 2.称取下列试剂,置于1L烧杯中. Tryptone?12g? Yeast Extract?24g Glycerol?4mL? 3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解. 4. 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌. 5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液. 6. 4℃保存.

7、TB/Apm培养基??? 组份浓度 1.2%(W/V)?? ?Tryptone? 2.4%(W/V)??? Yeast Extract 0.4%(V/V)???? ?Glycerol 17mM?KH2PO4 72mM?K2HPO4 0.1mg/mL?Ampicillin? 配制量 1L 配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL.溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100mL,高温高压灭菌.? 2. 称取下列试剂,置于1L烧杯中. Tryptone?12g Yeast Extract?24g? Glycerol?4mL 3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解. 4. 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌. ?5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin(100mg/mL). ?6. 均匀混合后4℃保存.

8、SOB培养基?组份浓度 2%(W/V)?????? Tryptone 0.5%(W/V)?? ?Yeast Extract 0.05%(W /V) NaCl 2.5mM?KCl 10mM?MgCl2? 配制量 1L ???配置方法 1. 配制250mM KCl溶液.?在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后,定容至100mL. 2. 配制2M MgCl2溶液.在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后,定容至100mL,高温高压灭菌. 3. 称取下列试剂,置于1L烧杯中.? Tryptone?20g Yeast Extract?5g NaCl?0.5g 4. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解.

5 量取10mL

250 mM KCl溶液,加入到烧杯中.? 6. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0. 7. 加入去离子水将培养基定容至1L. 8. 高温高压灭菌后,4℃保存. ????9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液.

9、SOC培养基?组份浓度?? ?2%(W/V)Tryptone 0.5%(W/V)Yeast Extract 0.05%(W /V)NaCl? 2.5mM?KCl 10mM?MgCl2 20mM?葡萄糖 配制量 100mL 配置方法 1. 配制1M葡萄糖溶液.将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22μm滤膜过滤除菌. 2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均匀混合. 3. 4℃保存.