PDF《超高压处理对 S卵白蛋白构象与功能特性的影响 س ز》

100、300与

5 0 0MP a 下处理

1 5m i n .升压速率约

2 5 0MP a / m i n , 降压速率约

3 0 0MP a / m i n .

1

4 S D S P A GE电泳 凝胶制备: 分离胶质量分数

1 2 %、 浓缩胶质量 分数

5 %. 样品处理: 用蛋白上样缓冲液配成1m g / m L 溶液, 沸水加热 3~ 5m i n .电泳条件: 浓缩 胶中恒流

2 5m A , 样品进入分离胶后调至

4 0m A , 恒流3h .

1

5 光谱测定

1

5

1 拉曼光谱 干燥的 S 卵白蛋白放在拉曼光谱仪下, 激光波 长785n m , 光栅密度为

6 0 0g r a d e s / c m , 功率

2 5m W, 狭缝宽度

2 0 0μ m , 扫描范围

40 0 0~

4 0 0c m-

1 , 每次 扫描 时间60s , 积分10次, 以苯丙氨酸(波数10

0 6c m-

1 ) 为归一化因子.

1

5

2 荧光光谱 用pH值

7 4的磷酸盐缓冲液, 将S卵白蛋白 样品稀释至质量浓度

0 5m g / m L , 超声处理 5m i n混 匀后, 室温下分别测定荧光光谱, 条件为: 激发波长

2 8 0n m , 狭缝宽度 5n m , 扫描范围

3 0 0~

5 0 0n m .

1

6 功能特性测定

1

6

1 溶解性 称取 S 卵白蛋白样品溶于质量分数

0

9 % N a C l 缓冲液中, 配置成

0 4m g / m L的蛋白溶液.室温下 磁力搅拌 1h , 取15m L于离心管中,

30 0 0r / m i n离心20m i n , 收集上清液.利用 B r a d f o r d蛋白浓度测 定试剂盒测定上清液蛋白质量分数.蛋白溶解性根 据上清液中蛋白质占原料中总的蛋白质的质量分数 来计算.

1

6

2 起泡能力 S 卵白蛋白 1g溶解于

1 0 0m L蒸馏水中, 室温 下于高速组织捣碎机中均质 2m i n (

1 00

0 0r / m i n ) , 然后快速移至

2 5 0m L量筒, 记下均质停止时泡沫体 积, 起泡性根据均质停止时泡沫体积与

1 0 0m L的百 分比来计算. 均质停止

3 0m i m后, 记下此时泡沫体积, 泡沫 稳定性根据

3 0m i n时泡沫占均质停止时泡沫的体 积分数来计算.

1

6

3 乳化性 S 卵白蛋白溶解于 p H值

74、01m o l / L的磷 酸盐缓冲 溶液中(1m g / m L ) .取30m L样品加入10m L 玉米油, 于室温下

1 00

0 0r / m i n匀质 1m i n以形成乳化液. 匀质后立即从乳化液底部吸取100μ L , 加到 5m L质量分数

0

1 %的SDS中混匀. 以质量分数

0

1 %的SDS溶液作空白, 于波长

5 0 0n m 处测其吸光度 A

1 , 即为乳化活性 E A .1 5m i n后, 再 次测定 吸光度A2,得乳化稳定性ES=A 1t / ( A

1 - A

2 ) , t 表示时间.

2 6

1 农业机械学报2013年2结果与分析

2

1 U HP对蛋白分子量的影响 不同压力处理后的 S 卵白蛋白 S D S P A G E电 泳如图

1 ( 图中从左至右为未经 U H P处理、 处理压 力

100、300和

5 0 0MP a ) 所示.由图分析可知, 与未 经UHP处理的样品相比, 经UHP处理后 S 卵白蛋 白的分子量分布没有明显变化. 图1不同 U H P处理 S 卵白蛋白的 S D S P A G E电泳图 F i g .

1 S D S P A G Ep r o f i l eo f S o v a l b u m i na f t e r U H Pu n d e r v a r i o u sp r e s s u r et r e a t m e n t s

2

2 拉曼光谱分析 U HP对蛋白构象的影响 蛋白质构象或构型的变化引起拉曼激光散射的 不同, 呈现不同的吸收峰位置、 强度和退偏比, 从而 得到酰胺Ⅰ、 酰胺Ⅲ带振动的二级结构信息, 以及酪 氨酸和色氨酸等侧链的构象信息及其随微环境的变 化情况[

1 7~

1 8 ] .图 2为经不同压力处理(

0 1MP a 指 未经 U H P处理, 下同) 后的 S 卵白蛋白拉曼谱图. 表 1列出了拉曼谱图的特征峰归属. 图2不同 U H P处理 S 卵白蛋白的拉曼图谱 F i g .