PDF《中国实验动物学会》

中国实验动物学会 团体标准 《实验动物 肺支原体普通 PCR 和实时 荧光 PCR 检测方法》 编制说明 联系人:张钰 联系

电话:020-84106803

13922483354 编制单位:广东省实验动物监测所 时间:2017 年3月31 日

一、任务来源 根据中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会的下达的

2017 年团体标 准制(修)订计划,由广东省实验动物监测所负责团体标准《实验动物 肺支原 体普通 PCR 和实时荧光 PCR 检测方法》起草工作.

该项目由全国实验动物标准 化技术委员会(SAC/TC281)技术审查,由中国实验动物学会归口管理. 本标准的编制工作是按照《中华人民共和国国家标准 GB/T1.1

2009 标准化 工作导则》第1部分 标准的结构和编写规则 的要求进行编写的.本标准是在国 家科技支撑计划 实验动物质量检测关键技术研究 (项目编号 2013BAK11B01) 和广东省科技 计划项目 广东省实验动 物检测技术平台 (项目编号2011B040200010)课题基础上制定而成的,在制定过程中参考了国内外相关文 献,对方法的敏感性、特异性、重复性等进行了研究,并对所建立的标准方法进 行了应用研究.

二、 编制过程 本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出, 广东省实验动 物监测所按照团体标准研制要求和编写工作的程序, 组成了由本单位专家和专业 技术人员参加的编写小组,制定了编写方案,并就编写工作进行了任务分工.编 制小组根据任务分工进行了资料收集和调查研究工作,在国家科技支撑计划 实 验动物质量检测关键技术研究 (项目编号 2013BAK11B01)和广东省科技计划 项目 广东省实验动物检测技术平台 (项目编号 2011B040200010)课题研究 基础上,组织编写实验动物肺支原体 PCR 检测方法技术资料.通过起草组成员 的努力,多次修改、补充和完善形成了标准和编制说明初稿.

2017 年3月,标准草案首先征求中国实验动物学会实验动物标准化专业委 员会的意见, 专家对标准稿提出了系列修订建议和意见.根据提出的意见编制组 对《实验动物 肺支原体株普通 PCR 和实时荧光 PCR 检测方法》标准草案进行 修改,形成本标准征求意见稿和编制说明.

三、标准制定背景和意义 支原体是一种简单的原核生物,其大小介于细菌和病毒之间,多数呈球形, 没有细胞壁. 肺支原体是啮齿类动物呼吸道疾病的主要病原体,肺支原体感染引 起鼠的急、慢性呼吸道疾病, 如鼻炎、中耳炎、气管炎和肺炎.肺支原体多为隐 性感染,且感染率较高,还可与细菌、病毒等引起合并感染,对呼吸道的损害更 为严重. 肺支原体是国内外实验动物健康监测的一个必检项目,快速准确地检测 肺支原体是有效控制该病原的前提.在肺支原体检测方法研究方面,分离培养法 因其可靠直接而成为肺支原体检测的首选方法,但因支原体分离培养法繁琐,检 出率不高,阻碍了该检测方法的应用.血清学检测方法如酶联免疫吸附试验 (ELISA)也应用于支原体检测,但是抗体检测方法中不能应用于免疫功能低下 或免疫缺陷小鼠如 SCID 小鼠和裸小鼠等的检测,因为它们不能产生正常的抗体 反应. 此外, 抗体检测有一定局限性, 一般只有活体动物才能采集血清用于检测, 对病死动物和一些动物源性的生物制品(如动物细胞,及其他生物材料)检测造 成限制. 传统的检测技术已不能满足实验动物质量检测需求. 随着分子生物学的迅速 发展,以PCR 技术为基础的各种分子生物学诊断技术成为病原微生物检测的重 要手段.PCR 病原检测方法具有特异性强、敏感度高、诊断快速等传统诊断方 法所无法比拟的优点. 美国和欧盟许多实验动物质量检测实验室都推荐采用 PCR 技术作为实验动物病原的检测方法. 国内一些实验动物检测机构也开展了实验动 物病原 PCR 检测技术研究,增加实验动物病原分子生物学检测技术方法除了应 用于实验动物质量检测之外, 还可以应用于实验动物产品、实验动物接种物和污 染环境评价等,具有快速、高效的特点.本项目在现有国家标准的基础上,增加 了普通 PCR 和实时荧光 PCR 检测方法,这些方法适用于肺支原体的快速诊断. 本标准的制定, 对实验大小鼠的肺支原体日常监测、流行病学调查及临床诊断都 具有重要的实用意义.