DOC《附件1》

液体样品,使用干燥失重后的残余物 附录A 检验方法 A.1 一般规定 本质量规格要求除另有规定外,在色谱分析中均使用色谱纯试剂和GB/T 6682中规定的一级水,其余检验所用试剂的纯度均为分析纯,试验用水应符合GB/T 6682中三级水的规定. A.2 鉴别试验 A.2.1 试样应具有较强水溶性,但不溶于乙醇、丙酮、甲醇和丁醇. A.2.2 称取0.5g粉末试样溶解在9.5g水中或量取1mL液体试样溶解在9mL水中,加入装有350mL水的1000mL量筒中,量筒加盖后用力摇晃30次后静置,30min后记录泡沫体积(mL),泡沫体积应达到150mL. A.2.3 按照皂素含量高效液相色谱测定法(A.5),试样主峰的保留时间应与皂素标准品的皂素主要组分(QS-18)主峰一致. A.2.4观察A.2.2中粉末试样溶液,溶液不应出现浑浊.将该溶液置于在520nm波长下测定其吸光度,吸光度应小于1.2.(此方法仅限粉末试样) A.3 pH的测定 A.3.1 仪器和设备 pH计. A.3.2 操作步骤 A.3.2.1 调整pH计 按仪器使用说明书调试和校正pH计. A.3.2.2 测定 称取适量试样,用水配制成4%(w/%)的皂树皮提取物待测液.然后用水冲洗电极探头,用滤纸轻轻吸干,将电极插入待测溶液中,调节温度调节器,使仪器指示温度与溶液温度相同,稳定后读数. A.4 丹宁酸的测定 A.4.1 试剂和材料 A.4.1.1乙酸. A.4.1.2聚乙烯聚吡咯烷酮. A.4.2 仪器和设备 A.4.2.1电热恒温干燥箱. A.4.2.2 离心机. A.4.3 分析步骤 称取3.0g粉末试样,或含有3.0g固形物(使用干燥失重数值换算)的液体试样,精确至0.01 g,溶解在250mL水中,用乙酸调整pH为3.5,量取25 mL溶液,在105℃的温度条件下,干燥5 h,冷却,称重(m1).量取50 mL溶液与360 mg聚乙烯聚吡咯烷酮混合,在室温下搅拌30 min,然后以3000 rpm的转速离心10 min.收集上层清液,并在105℃的温度条件下干燥5h,冷却,称重(m2). A.4.4 结果计算 丹宁酸(以干基计)的质量分数w按式(A.1)计算: ……………(A.1) 式中: m1――加入聚乙烯聚吡咯烷酮前的溶液干燥后的质量,单位为克(g);

m2――加入聚乙烯聚吡咯烷酮后的溶液干燥后的质量,单位为克(g);

2――换算系数. 试验结果以平行测定结果的算术平均值为准.在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于5.0 %. A.5 皂素含量的测定 A.5.1 测定方法原理: 使用高效液相色谱将皂素的主要组分QS-

7、QS-

17、QS-18和QS-21分离,皂树皮提取物中皂素总水平以QS-

7、QS-

17、QS-18和QS-21总量计算. A.5.2 试剂和材料 A.5.2.1 皂素标准品(或类似皂素含量已知的皂素标准品). A.5.2.2 三氟乙酸. A.5.2.3 高效液相色谱级乙腈. A.5.2.4 0.2?m孔径的过滤膜. A.5.3 仪器和设备 高效液相色谱仪:配备紫外检测器. A.5.4 参考色谱条件 A.5.4.1 色谱柱:C4键合硅胶色谱柱(长4.6*250 mm,孔径300A, 粒径5μm)或其他等效色谱柱. A.5.4.2 柱温:室温. A.5.4.3 进样方式:梯度进样. A.5.4.4 流动相: 流动相A:将0.15%三氟乙酸溶解于高效液相色谱级用水;

流动相B:将0.15%三氟乙酸溶解于高效液相色谱级乙腈. A.5.4.5流速:1.0 mL/min. A.5.4.6 检测波长:220nm. A.5.4.7 梯度洗脱条件见表A.1. 表A.1 梯度洗脱条件 时间(min) 流动相 A% 流动相 B% 流速(mL/min)

0 70

30 1.0

40 55

45 1.0

45 70

30 1.0 A.5.4.8 进样体积:20 μL. A.5.5 分析步骤 A.5.5.1 试样溶液的制备 A.5.5.1.1 粉末试样 称取0.5g试样,精确至0.001 g,在9.5g水中溶解,使用0.2?m孔径的过滤膜进行过滤,制备好的试样溶液约为10mL. A.5.5.1.2 液体试样 称取1.0g试样,精确至0.001 g,用9mL水稀释,使用0.2?m孔径的过滤膜进行过滤,制备好的试样溶液约为10mL. A.5.5.2 标准溶液的制备 称取1.5g皂素标准品,精确至0.001 g,在100mL水中溶解,使用0.2?m孔径的过滤膜进行过滤. A.5.6 结果计算 A.5.6.1 根据上述样品制备方法制备的溶液中皂素的含量Csap,单位为毫克每毫升(mg/mL),按式(A.2)计算: ……………(A.2) 式中: C标准――标准品的皂素浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL)(例如C标准=13.5 mg/mL表示:1.5g标准样品中皂素含量为90%);