PDF《NEBuilder HiFi DNA Assembly》

新一代 DNA 组装与克隆工具 NEBuilder ? HiFi DNA Assembly NEBuilder HiFi DNA Assembly 您是初次尝试 DNA 组装? NEBuilder HiFi is the next generation of DNA assembly and cloning.

PRODUCT NEB # SIZE NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix E2621S/L/X 10/50/250 rxns NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kit E5520S

10 rxns Ordering Information NEW ENGLAND BIOLABS? , NEB? , and NEBUILDER? are registered trademarks of New England Biolabs, Inc. GIBSON ASSEMBLY? is a registered trademark of Synthetic Genomics, Inc. 带有 15-30 bp 互补序列的 DNA 插入片段(通过 PCR 扩增获得) 50°C 孵育 15-60 分钟 转化 线性化 载体 DNA 分析 或或菌落 PCR 测序 酶切 DNA 片段制备 NEBuilder HiFi DNA Assembly 预混液 + 单管反应 ? 核酸外切酶消化 5? 末端形成 3? 端单链突出 ? DNA 片段退火,DNA 聚合酶从 3? 端扩增延伸填补缺口 ? DNA 连接酶连接切刻 来源 ? PCR ? 限制性内切酶消化 ? DNA 合成 (e.g., gBlocks) A B C 完成组装的 DNA A B C NEBuilder HiFi DNA 组装克隆方法综述 4大理由选择 NEBuilder HiFi

1 省时

15 分钟内完成简单快速的无缝克隆

2 灵活 可用于"标准长度"片段和大片段的 组装,片段最多可达

12 个3兼容 可直接进行下游实验,DNA 直接用 于转化或者作为 PCR 或RCA 的模板

4 适用性强 适用于各种 DNA 改造,包括定点突变 NEBuilder HiFi DNA Assembly 请登陆 NEBuilderHiFi.com 了解更 多NEBuilder 的产品优势 产品名称 货号 规格 NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix E2621S/L/X 10/50/250 rxns 订购信息 NEW ENGLAND BIOLABS? ,NEB? , 和NEBUILDER? 均为 New England Biolabs, Inc. 的注册商标;

GIBSON ASSEMBLY? 为Synthetic Genomics, Inc. 的注册商标. IN-FUSION? 为ClonTech Laboratories, Inc. 的注册商标. NEBuilder HiFi DNA Assembly 可实现几乎无误的 DNA 片段连接, 甚至包括一些存在 5? - 端和 3? - 端错配的片段. 试剂盒通过使 用一种新型高保真聚合酶来实现简单快速的无缝克隆. 因此 NEBuilder HiFi 被认为是新一代 DNA 组装与克隆利器. 还在使用 In-Fusion? HD 或NEB Gibson Assembly? 进行克隆? 比In-Fusion HD 和NEB Gibson Assembly 性能更优越: 克隆后无需反复筛选、 重测序, 真正实现无差错、高保真组装 无论是低起始量还是较长片段 DNA,片段连接效率更高 由于可去除 5? - 和3? - 末端 的错配序列,NEBuilder HiFi 可进行连续组装.(省去耗时 的PCR 扩增步骤从而节省时 间)** 使用合成的单链 DNA 寡聚核苷 酸桥式连接两个双链 DNA 片段 (如接头插入或 gRNA 文库) , 构建简单又快速 ** 不同克隆系统之间转换方便, NEBuilder HiFi 与Gibson 等其它 系统兼容 NEBuilder 产品无技术使用许 可费 ** 登陆 NEBuilderHiFi.com 观看 教学视频 为加快您的实验进程,请 登陆 NEBuilder.neb.com 选择NEBuilder Assembly Tool 进行引物设计 与In-Fusion HD 和NEB Gibson Assembly 相比,NEBuilder HiFi DNA Assembly 优势更加明显,表现在:由于使用了高保真聚合酶而准确度更高;

能够 对5? - 端和 3? - 端存在错配的 DNA 片段进行组装;

更低的 DNA 起始量 要求,并能用单链的 DNA 寡核苷酸片段桥式连接

2 个双链 DNA 片段. NEBuilder HiFi DNA Assembly 是进行高效准确的 DNA 片段组装的最佳 选择. 与NEB Gibson Assembly 相比, NEBuilder HiFi DNA Assembly 能提供 更高的效率与准确度

500 450

400 350

300 250

200 150

100 50

0 2-Fragment Assembly 6-Fragment Assembly NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix NEB Gibson Assembly Master Mix Number of Colonies 根据推荐的反应体系进行

2 个片段和

6 个 片段的组装反应.无论是

2 个片段还是

6 个片段的组装,NEBuilder HiFi DNA Assembly 获得的菌落数均多于 NEB Gibson Assembly. 与In-Fusion HD 不同,NEBuilder HiFi DNA Assembly 成功地将 3? - 和5? - 末端存在错 配的片段完成组装 In-Fusion ? NEBuilder ? HiFi T7 Express Competent E. coli Blue colonies from 1/10 of transformation outgrowth

0 1,400 1,200 1,000

800 600

400 200 根据推荐的反应体系,使用随 NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix 产品附带的 NEBuilder 阳性对照 建立反应.组装反应后,取2μl 反应液转化至 T7 表达 E. coli 感受态细胞中.十分之一的感受态 菌液最终涂布于含 ApR ,IPTG 和X-Gal 的平板.蓝 色菌落说明片段组装正确.与In-Fusion HD 不同的 是, NEBuilder HiFi 校正了错配的末端, 完成了组装. DNA 组装产品对比表 NEBuilder HiFi DNA Assembly NEB Gibson Assembly In-Fusion HD 组装效率 片段共价 连接?* 组装效率 片段共价 连接?* 组装效率 片段共价 连接?*

2 个片段的组装 片段无错配 +++ 是++ 是++ 否3? C 和5? C 末端存在错配 +++ 是++ 是X否4个片段的组装

15 bp 的重叠区且无错配 +++ 是++ 是++ 否25 bp 的重叠区且无错配 +++ 是++ 是++ 否 寡核苷酸的组装 存在 3? C 和5? C 突出末端 +++ 是++ 是X否平末端且无错配 +++ 是++ 是X否单链寡核苷酸和载体 +++ 是NP 是X否+++ 效果最佳;

推荐使用 ++ 效果良好;

但其它产品效果更好 + 有效果,但不推荐使用 X 无效果 NP 未进行实验 * 使用 T5 核酸外切酶处理组装后的产物,之后进行 PCR 检测.只有使用共价连接的产物不会被 T5 核酸 外切酶消化,并可作为模板进行成功的 PCR 扩增. NEBuilder ? V1.7.7 Assembly Tool ilder Assembly Tool can be used to de gment sequences a ed 需要帮您设计 DNA 组装引物吗? 请登录 NEBuilder.neb.com 尝试 使用 NEBuilder Assembly Tool 吧NEB(北京) 客服及技术支持 客服

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