PDF《山东省部分地区屠宰场猪旋毛虫病检测》

11 旋毛虫病(Trichinellosis)是由旋毛虫引起的 一种严重的人兽共患寄生虫病.

人类感染旋毛虫主 要是通过生食或半生食含有幼虫囊包的猪肉及猪肉 制品所致.旋毛虫病不仅是一个非常重要的公共卫 生问题,给人类健康带来严重威胁,而且对畜牧养 殖业、肉食品加工业,以及外贸出口造成严重的经 济损失,已成为影响我国食品安全和人类健康的重 要因素之一. 在屠宰检疫中, 旋毛虫是首检寄生虫, 为肉类和肉制品的必检项目 [1] .压片镜检法和免疫 胶体金检测法相结合是旋毛虫屠宰检疫的主要方 式,但现场检出率较低.为了解山东省屠宰场猪旋 毛虫感染情况,对2015―2017 年从全省

9 个市猪 屠宰场采集的血清和膈肌肉样进行旋毛虫病检测.

1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 猪血清和膈肌 从山东省

9 个市(济南、 临沂、日照、烟台、潍坊、枣庄、德州、淄博和青 岛)28 个猪屠宰场,随机采取外观健康猪血清

758 份,对应猪两侧膈肌肉样

758 份.每头猪采集血清

1 mL,存储备用;

膈肌样品

100 g/ 份,注明生猪 来源.所有血清样品和膈肌样品编号一致. 1.1.2 试剂 旋毛虫抗体 ELISA 快速诊断检测 试剂盒(货号 273501):德国 Qiagen 公司提供, 山东省部分地区屠宰场猪旋毛虫病检测 盖文燕,王君玮,王娟,黄秀梅,曲志娜,洪军(中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032) 摘要:为了解山东省屠宰场猪群的旋毛虫感染情况,对2015―2017 年从全省

9 个市猪屠宰场采集的

758 头份 血清,采用 ELISA 方法进行旋毛虫抗体检测,发现近

3 年的旋毛虫抗体阳性率分别为 1.42%、1.54%、1.74%, 平均阳性率为 1.58%.对12 份ELISA 检测阳性猪的膈肌肉样进行旋毛虫压片镜检和消化法检测,均未发现旋 毛虫虫体.ELISA 抗体检测结果表明,山东省部分地区屠宰猪群存在不同程度的旋毛虫感染,且在个别地区呈 持续感染状态. 关键词 : 旋毛虫 ;

ELISA ;

血清学 ;

压片镜检法 ;

消化法 中图分类号 : S851.3 文献标识码 : A 文章编号 : 1005-944X(2018)01-0011-03 DOI : 10.3969/j.issn.1005-944X.2018.01.003 Swine Trichinosis Detection in Slaughterhouses in Some Areas of Shandong Province Gai Wenyan,Wang Junwei,Wang Juan,Huang Xiumei,Qu Zhina,Hong Jun (China Animal Health and Epidemiology Center,Qingdao,Shandong 266032,China) Abstract : In order to recognize the infection status of swine Trichinosis in slaughterhouses in Shandong Province,

758 serums were collected from swine slaughterhouses of

9 cities from

2015 to 2017,and detection of Trichinella antibody was carried out by ELISA. The results showed that the antibody positive rates from

2015 to

2017 were 1.42%, 1.54% and 1.74%,respectively,with an average position rate of 1.58%. And

12 phrenic muscle samples,of which the ELISA test was positive,were tested by tabletting microscopy and arti?cial digestion methods,and no Trichinella spiralis was found. The results of ELISA antibody test showed that there were different degrees of Trichinella infection in slaughtered swine in some area of Shandong Province,and there was persistent infection status in individual regions. Key words : Trichinella spiralis ;

ELISA ;

serology ;

tabletting microscopy ;

arti?cial digestion method 基金项目:国 家农产品质量安全风险评估专项(GJFP201700703) 通信作者 : 王君玮

12 主要检测猪及野猪的血清和血浆抗体;

消化液: 胃蛋白酶(3

000 UI)10 g、盐酸(质量体积比 1.19 g/mL)10 mL、蒸馏水

1 000 mL,40 ℃搅拌 溶解,现用现配. 1.2 方法 1.2.1 ELISA 方法 严格按照试剂盒使用说明书 操作,对实验结果用光学密度(OD450)测量.结 果判断:在酶标仪 OD450 波长读结果;

阳性对照结 果的 OD450 ≥ 0.7,阴性对照结果的 OD450 ≤ 0.2, 结果成立;

S/P ≥ 0.3 判定为阳性,S/P ≤ 0.3 判定 为阴性. 1.2.2 压片镜检法 取膈肌肉样,撕去外膜,用 大拇指和中指握住肉样两端,以食指顶住,使肌纤 维绷紧,用小剪刀顺肌纤维方向,随机取米粒大肉 样(见到针尖大小白点时必须剪下),每份肉样剪

24 粒;

将剪下的肉粒均匀放在清洁玻片上,排成

2 排,每排

12 粒;

盖上玻片,轻轻压平、压均匀, 置显微镜下观察(如果是冰冻的肉样,可用 5% 的 美兰染色

1 min 后检查). 1.2.3 消化法 将ELISA 检测阳性相对应的膈肌 肉样,应用本实验室配置的消化液,严格按照国标 《猪旋毛虫病诊断技术》(GB/T18642―2002)规 定方法操作.

2 结果 共检测山东省

9 个市

28 个猪屠宰场的血清

758 份,发现 2015―2017 年旋毛虫抗体阳性率分 别为1.42%(3/211)、1.54%(4/260)、1.74% (5/287),平均阳性率为 1.58%(12/758);

同时 对12 份ELISA 检测阳性血清对应的膈肌样品,直 接进行压片镜检和消化法检测,均未检出旋毛虫 体(表1).

3 讨论 动物旋毛虫病的检测方法包括肌肉压片镜检 法、消化法和血清学法.本研究应用

3 种检测方法 对同一编号样品进行检测.从3种方法检测结果来 看,ELISA 法检出率最高,3 年的平均检出率达到 1.58%;

压片镜检和消化法均未检出虫体.3 种方 法检测结果差异较大.究其原因可能与

3 种检测方 法的敏感性、检测人员的操作熟练程度,以及旋毛 虫的发育史、感染特点和感染轻度有关.压片镜检 法是许多国家肉类中旋毛虫的检疫方法.该法敏感 性较低,每克肌肉含有

6 条或

6 条以下幼虫时的漏 检率达 52%[2] ,因此目前不是旋毛虫检疫的首选方 法.消化法为国际旋毛虫委员会推荐使用的方法 [3] , 其检出率为每克肌肉中有

1 个幼虫.但李峰等 [4] 对每克含有

1 个幼虫的猪肉,用消化法进行检测的 幼虫检出率仅为 10%,说明该法极易漏检.血清 学方法主要为 ELISA 法.该法可以检测出每克肌 肉小于

1 个虫体的感染强度,敏感性高且耗时短, 但对旋毛虫早期感染检测的假阳性率偏高,同时血 清学方法只能用于检测血清样品,无法检测屠宰后 肉品.从上述

3 种方法的特点来看,镜检法只适用 于中度或重度感染的猪,在感染早期及轻度感染时 不适合使用;

在没有酶标仪、试剂盒的情况下,对 屠宰后肉品的检疫,可以选用消化法.ELISA 法 虽然其特异性有待于研究,但有灵敏性高和检出 率高的特点,可用于血清学诊断和血清流行病学 调查,同时也可用于感染猪的生前诊断.本研究选 用3种检测方法,对山东省部分地区屠宰场进行 猪旋毛虫病检测,可以做到早确诊、早治疗、早康 复,从而避免感染旋毛虫猪肉的上市,让人民群众 吃上放心肉. ELISA 检测结果显示,2015―2017 年山东省

9 个市屠宰场猪群存在不同程度的猪旋毛虫感染, 表1山东省部分地区猪屠宰场旋毛虫抗体 ELISA 检测结果 地市

2015 年2016 年2017 年 平均阳 性率 /% 总数 / 份 阳性 数/份阳性 率/% 总数 / 份 阳性 数/份阳性 率/% 总数 / 份 阳性 数/份阳性 率/% 济南

39 1 2.56

32 0 0.00 1.41 青岛

20 0 0.00

160 0 0.00

40 0 0.00 0.00 淄博

74 0 0.00 0.00 日照

29 1 3.45 3.45 临沂

40 1 2.50

100 4 4.00

72 4 5.56 4.25 德州

40 0 0.00 0.00 菏泽

52 1 1.92 1.92 烟台

20 0 0.00 0.00 枣庄

40 0 0.00 0.00 合计

211 3 1.42

260 4 1.54

287 5 1.74 1.58 注:空白表示未检测 (下转第

31 页)

31 统一的实施方案. 3.3 明确检疫犬经费仅供退役犬使用 建议政策制定时,明确退役检疫犬经费使用 情况.一方面,可以保障经费不被挪用,保障退役 检疫犬的动物福利;

另一方面也可以为需要采用企 业外包模式的部门提供经费支持. 3.4 完善退役检疫犬的后续监督 对退役检疫犬的身体状况、饲养环境制定相 应标准,明确退役检疫犬管理责任.有了标准和责 任,可以有效提升后续监督效率. 3.5 将检疫犬退役管理纳入检疫犬绩效考核 目前,国家质检总局动植司检疫犬专家组正 在研究检疫犬绩效考核的具体内容. 如果检疫犬的退 役管理能够纳入绩效考核,各单位都会更加重视此 项工作, 退役检疫犬的动物福利也可以得到应有保障. 3.6 明确功勋检疫犬待遇 功勋检疫犬应获得专有的饲养管理,并在去 世后获得荣誉殡葬.功勋犬的退役嘉奖对检疫犬工 作十分有意义,可以有效提升检疫犬工作质量. 参考文献: [1] 罗朝科,黄明睿 . 检疫犬在口岸检疫查验上的应用和管 理[J]. 畜牧与兽医,2014,46(10):103-105. [2] 郑传发,刘佳琪,韦兵等 . 澳大利亚检疫犬应用模式对 我国出入境检疫的启示 [J]. 中国动物检疫,2016,33 (6):36-39. [3] 蔡守秋 . 论动物福利法的基本理念 [J]. 山东科技大学学 报(社会科学版),2006(1):27-30. [4] 罗秉坤,孙林,张可等 . 退役工作犬安置问题的思考 [J]. 中国工作犬业,2013(8):47-48. (责任编辑:孙荣钊) 旋毛虫抗体平均阳性率为 1.58%,且在个别地区呈 持续感染状态.各地区应高度重视并积极开展猪旋 毛虫病防治工作, 认真做好屠宰场的猪旋毛虫检验. 本次调查的山东省部分地区屠宰场猪旋毛虫 的平均感染率与杨永斌等 [5] 报道的青海省部分商 品猪旋毛虫感染阳性率为 1.78% 的结果相近,但 明显低于韦春葵等 [6]

2008 年对广西市崇左市调查 的猪屠宰场旋毛虫感染阳性率(25.9%),高于彭 达平等 [7]

2014 年对东莞市屠宰场调查的旋毛虫感 染阳性率(0.44%).这可能与不同地区养殖场的 卫生条件、人员卫生习惯等因素有关.本次调查覆 盖了山东省

9 个市(济南、临沂、日照、烟台、潍坊、枣庄、德州、淄博和青岛)28 个猪屠宰场. 受采样条件限制,只在青岛市和临沂市两个地区连 续3年采集到样品, 在其他地区都是分散采集到的. 但是,连续

3 年的检测结果仍能反映出山东省部分 地区屠宰场猪群的旋毛虫感染状况. 参考文献: [1] 崔晶,王中全 . 肉类及肉类食品中旋毛虫检疫的现状与 对策 [J]. 肉品卫生,2005(12):20-23. [2] BECK R,MIHALJEVIC Z,MARINCULIC A. Comparison of trichinelloscopy with a digestion method for the detection of Trichinella larvae in muscle tissue from naturally infected pigs with low level infections [J]. Veterinary parasitology,2005,132(1/2):97-100. [3] GAMBLE H R,BESSONOV A S,CUPERLOVIC K,et al. International commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption [J]. Veterinary parasitology,2000, 93(3/4):393-408. [4] 李峰,王莉,王中全,等.人工消化法对猪肉中旋毛虫 检疫敏感性的研究[J]. 热带病与寄生虫学, 2008,

6 (3) : 133-135. [5] 杨永斌,张秀娟,叶成红,等.青海省部分地区商品猪 旋毛虫感染的血清学调查 [J]. 动物医学进展,2011, 32(9):135-136. [6] 韦春葵,黄国敏 . 崇左市屠宰猪旋毛虫感染情况调查报 告[J]. 畜牧兽医科技信息,2008(9):53-54. [7] 彭达平,卢小明,谢柱彬,等.东莞市屠宰场旋毛虫血 清学调查 [J]. 畜牧兽医科技信息,2016(6):31-32. (责任编辑:朱迪国) (上接第

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