PDF《多功能酶标仪-软件操作》

多功能酶标仪-软件操作 (1) 开仪器电源,仪器指示灯由黄色变为绿色,即可开显示器和电脑主机 (2) 双击仪器控制软件 SkanIt RE for Varioskan Flash 2.

4.5 ,进入 Log on To SkanIt Software 对话框,直接点击 ok 按钮 (3) 进入仪器控制软件界面 SkanIt Software 2.4.5,点击 Open session 按钮 打开已运行的实验 (4) 点击 New session 按钮, 新建实验, 出现 Create New session 对话框, 给即将开展的实验命名 (5) 点击 Next 按钮,进入 Select plate template 对话框,根据实验时所 使用的

96 孔或

384 孔板的型号进行选择 (6) 点击 Next 按钮, 进入实验方案、 数据存储位置选择, 可在 SkanIt software 目录下新建一个文件下并命名,选中新建文件夹,点击 Finish 按钮 (7) 进入 Plate Layout 界面,对96 孔板或

384 孔板进行编辑. New 增 加孔板数. Delete 删除孔板数. Wizard 对实验板上每个样品孔进行 编辑说明. Clear 在样品板上选中编辑错误的区域,点击该按钮进行清 除. Print 打印编辑好的孔板. Description 对每个样品孔板进行描述 说明. Plate Layout 界面有

4 个图标(具体见软件界面)点击后可显示 整个样品板、放大样品板、缩小样品板、最佳显示样品板 (8) 点击 Wizard 按钮,进入 Fill Wizard 对话框,对孔板上每个孔中的 样品进行编写说明. Type: 选择样品类型 (5 种: Blank, Calibrator, Control, Empty,Unknown) .Name:样品名称,人工手动输入.Group:默认为 Assay.No of …:样品的数量.Filling order,样品填充顺序,有上下左右 四种.No of replicates:设置样品重复测定次数.Specific blanks,特定的 空白对照, 一般设置为默认值 None. Current plate: 当前孔板编号. Dilution: 样品稀释倍数,样品未稀释填写数值为 1.Unit:样品的浓度单位.填写 完成之后,点击 Add 按钮,进行其它样品孔的编写说明.编写过程中 发现编写错误,可点击 Close 按钮,关闭当前界面,在 Plate Layout 界面,将填写错误的部分选中,点击 Clear 按钮即可清除 (9) 标准品的样品孔的设置,例如蛋白质浓度测定时标准曲线的制作.Type 设置为 Calibrator,Name 设置为 Cal,Group 设置为 Assay 默认值,No of Calibrators 填写标准样品的数量,No of replicates 填写每个样品重复测定 次数,Filling order 样品填充顺序.点击 Generate series 按钮,进入 Concentration 对话框. Unit: 标准品浓度单位. 选中 Series 填写 Series 参数.Initial value:填写起始标准品样品的浓度值.Operators 四种方案: Multiply 倍数,Add 增加,Divide 除数,Subtract 递减.Step by:倍数值/ 除数值/增加量/递减量,填写具体的数值.设置好之后点击 ok 按钮, 完成序列设置. (10)待测样品的设置,待测样品设置为 Unknown ,同样需要设置样品的数 量、每个样品的重复测定次数,填充顺序及起点、稀释倍数和浓度单位、 孔板名称,设置好之后点击 Add (11)选中 Protocol ,进入 Protocol Properities ① 点击 Photometric measurement ,测定光吸收值,填写光波长 wavelength, 点击 Save 按钮 ② 点击 Photometric Scanning ,波段扫描,需要设置

3 个参数,起始波长,结 束波长,Step size 设置为默认值 2nm,点击 Save 按钮 ③ 点击 Fluorometric measurement ,测定样品的荧光值,需要对激发光和发射 光波长进行设置,设置完成后点击 Save 按钮 ④ 点击 Fluorometric Scanning ,样品荧光扫描. (a)固定激发光波长,扫描 发射荧光;

(b)固定发射光波长,扫描激发光波长.需要设定参数:激发光 和发射光波长,扫描波段及 Step size(默认值 2nm) ⑤ 点击 Luminometric measurement , 样品自发荧光测定. Optics 可选择 Normal 、 Monochromator 和 Filter 三种, 仪器未配备滤镜, 一般不选择使用 Filter , 选择 Monochromator ,需要填写波长参数 ⑥ 点击 Luminometric scanning ,荧光波普扫描,波段和 Step size 需要进行设置 ⑦ 点击 TRF measurement ,时间分辨荧光检测,基本同荧光检测,不同的是 要设置延迟时间(TRF delay time)和积分时间(TRF integration time) ⑧ 点击 TRF scanning ,时间分辨荧光光谱扫描,基本同荧光扫描,需要设置 延迟时间和积分时间 ⑨ 点击 TRF decay ,时间分辨荧光延迟时间和积分时间扫描 ⑩ 根据实验要求在实验步骤前后添加 action.Run plate in/Run plate out, 关门/ 开门.Incubate,恒温孵育,设置时间和温度.Pause,暂时中止,设置中止 时间.Shake,震动混匀,设置震动时间. (12)点击 Result ,进入结果分析设置 ①Blank substration 减去空白,Blank type 选择 Average(必须在 Plate layout 里面 设置 Blank) ②Basic statistics 基本统计, 包括 SD 标准差和 CV%变异系数 (必须在 Plate layout 里面设置 Replicates) ③Quantitative Curve Fit 曲线拟合,Fit type 中Linear regression(LLS)代表直线 拟合,Four parameter logistic 代表四参数拟合(必须在 Plate layout 里面设置 Calibrator 及其浓度) ④ΣUser-defined equation 用户自定义公式,可设置双波长扣减或扣除板子本底 值等复杂的设置 (13)完成上述工作后,运行程序前保存所编辑的程序,点击 Run plate out 出板,放入孔板后,点击 Run plate in ,运行程序开始测定样品 (14)结果导出-Report 模式 ①在Result 中增加 Report.在参数面板中,将需要保存的参数选中,添加 ②点击 View Report 切换到 Report 面板,对导出的结果进行浏览.按保存,输入 文件名称,选择文件类型(.xl 或.pdf 或.txt) ,一般保存结果至 Excel 文件 (15)结果导出-简单模式(Quick Export) ①选中某一结果,例如 Photometric1.按右键,点击 Quick Export,或菜单 Calculations/Quick eport.选择 Matrix,确定后保存结果至 TXT 文本文件 ②用记事本打开保存的文本文件.数据是按矩阵形式保存的,与Plate layout 对应③保存的数据也可以用 Excel 打开 ........