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中国病毒学VI ROLOG I CA S咖CA

7 毒l(1j}Vo i +9 No.

2 J un.

1 99 马立克氏病病毒的分子生物学研究进展 罗满林 蔡 宝祥J 陈溥言 百南京210095)5容 t . ( 南京农业大学动物医学系,南京、)K(.eAd va nc e s i n M o l e c u l a r Bi o l o g y o f M a r e k S Di s e a s e Vi r us Lu o M a nl i n . Ca i . B a o xi a ng Ch e n Pu ya n ( D e ~ r r t mo ~o f A a f i n a l Mr d / e / n e ,N% 汹姆dU姐蛳.210095)关键词 } y we e d s ,分 子生物 学 马立克 氏病 ( Ma r e k s d i s e a s ~ , MD ) 是一种具有高度 传染性 淋 巴组织增生性疾 病,病理上 以 外周 神经 、 性腺 、 虹膜 、 各种脏器 、 肌 肉和 皮肤发生单核细胞浸润为特 征. 本病 既是危害世界养 禽业 最严重 的传染病 之一 , 又是 世界上第一个用 疫苗预 防病 毒性 肿癌获得 成功 的范倒 , 因而 加强 对本病 的研 究不仅 有助于促进 养禽业发展 , 而且也可为探索 病毒致 瘤机制 、 预防和控 制 肿瘤性疾病提 供理 想模型 , 故世 界各国都很注重对本病的研究. 本病 的致病 因子 属疱疹病 毒 科的 一个 成员―― 马 立克 氏病 病毒(Ma r e k , s d i s e . a s ~v i r u s , MD V) . 根据致病性和血清学 反应不 同,可将 MDV相关 疱疹病 毒划分为

3 个 不同血清 型:血清 I 型包括 引起 高发性 内脏或 神经肿瘤 的MD V及 其传代后 失去致病性和致瘤性的弱毒变异株 ;

血清

2 型为非致 瘤性 自然弱毒株 ;

血清

3 型为用于疫苗的火鸡疱疹病 毒,亦无致病性 . 由于 MD V具有 高度的细胞结合特性 , 给病 毒和 蛋白研 究增 舔困难 .近年 来,随着单克 隆抗体(Mc A b ) 、 核 酸杂交 、 聚合酶 链 反应 ( P C R ) 及DNA重 组等 新技 术的采 用,极大地推 动了MD V分子 生物学 的研究 , 尤其在病 毒基 因组结构 、 病毒特异性 蛋白结构与功 能,致瘤株 鉴定及 基 因工程疫苗方面 , 取得了令 人鼓舞的进展 , 本文将就此作一概述 . I MD V基 因组 MDV DNA为线 状双 股分子、浮密 度L706g/ml , G+c含量6,分子 量108~120*

1 0 ~ D, 相 当于 I

6 6 ~1

8 4 千 碱基对 ( k b ) .从感染的宿主 细胞提取病 毒DNA相 当围难[ . 应用 D N A克隆 片段作交叉杂交或 电镜检查 , 可见变性 的M'

DVDNA是 由大小不 同的两个 单链环通过一双链臂连接 而成 , 两个单链环分别来 自长单 一序列( U L ) 和 短单一序 列( u ) , 双链 臂则 由末端长 、 短反向重复序列( T R 、 T R s ) 与相应 的内部长 、 短反向重复序 列( I R I R ) 碱基互 补而成口 ] .M '

D V基因组这种结构与 Ⅱ 一 疱疹病毒亚科的人单纯痘疹病毒 I 型( H S V .

1 ) 、 牛的溃 ・ 本 文于 i $

9 3 年3月13日收 到,1]H8H修 回~垂维普资讯 http://www.cqvip.com

8 8 中国病毒学第9卷 疡性 乳头炎病 毒( U MV) 、 B _ 疱疹病毒 亚科 的人巨细胞病 毒(CMV) 相同,而与 Y 一 疮疹病 毒亚 科的E―B病 毒及 G '

- 疱疹 病毒亚科的 伪狂犬病病 毒( P RV) 不同口 ] . l

9 8 4年,Fukuchl等将 MD V血清l型强毒 GA株的BamHI消化物 中的

2 7个 片段 分别 克 隆于不 同质 粒,构建了 B a mH I 、 B g l I 和Sinai内切酶 的物理 图谱r , 从而拉 开了 MD V基 因组 结 构分析的帷幕.此后 , I g a r a s h i 等构建了 HV TD NA基 因组的 B a mHI 、 Hi n dⅢ、 P s t I 限制 内切酶 图谱r s ;

, O n o等构 建了MD V血清 2型DNA基 因组 的BamHI 、 E c o RI 和Xh o I的限制性 内 切酶 图谱[

6 ] .比较 分析发现 , 在非严 格条件下 , 三 个血清型的 D N A之间有一 定同源性 , 但 在严 格条 件 下杂交 , 几乎不显 同源性 .它们各育一个独立的限制性酶 切图谱 . MD V基 因组 编码 多种病 毒特 异性的 蛋 白抗原 , 对这些抗原基 因的逐 个定位及其结 构分析 是一项艰 巨工 作 .经过 多年努力 , 已弄清了许多抗 原基 因的定位及其组成 , 其 中主要有 : 编码 MD V分 泌性糖 蛋白( g P )

5 7 ―6

5 ( 即 A抗原 ) 的多肽前体基 因定位 于UL区4.6kb的 B a mHI ― B 片段 ( 精 确位 点在 P v uI― E c o R I 双 酶切 位点 之间2.35kb亚 片段 ) , 基 因转 录方 向从 P v uI- - ~ E c o RI , 该亚片段包括一个 由l515碱基对 ( b p ) 组成的开放式 阅读框 ( O RF ) , 其中 G+c 为4l,经翻译后可 产生505个 氨基酸残基组成的、分子 量为56805D的多肽[.编码MD V非分 泌性 g P l

0 0 、 g P

6 0 、 g P

4 9糖蛋白复合 物( 即 B抗 原) 基因 定位 于U区中部 B a mHI Ka 和I3两个 相邻 片段口 ] , 它包括可编 码865个 氨基 酸的 原始翻译产物的单个 O R F, 其中G+C为d2,ORF两 端 负责 启动和 终止转 录 的序 列十分 保守.据推测MD V z B基因与HSV、 P R V、 水 痘带状 疱疹病 毒( V Z V) 的gB基因有广瑟 同源性 . 几种病毒 g B氨基 酸同源性 比较 分析 , 可发现 MDV与 疱疹 病毒之 间同源性平均 为50,而与 C MV和E―B病毒 同源性分别 只有29和28.2编码与 MDV致瘤性有关的

3 8 k D磷 蛋白( p p

3 8 ) 基 因定位于 B a m HI H片段r s - - . 它包括 一十由870bp组成的单个 O R F, 编码

2 9 0十氨基酸残基组成的 多肽 . 在BamHI D片段末 见有p p

3 8 的整个 O R F复本 , 但 在该 片段 T R L区发现部分相 同序列 ( 可 编码 5个氨基酸) . 在MD V基 因组 u s区中部 , 确定了

5 5 k b大小的 E c o RI 片段 序列 .它包括有 6十ORF, 其 中除 O R F ]转录方 向由右 向左外 , 其余均 是 由左往右 .O R FI与编码 HS V― l ( U S

2 ) 基 因同源 , 并与ORF2广泛重叠 O R F 3与HSVU S 3基因同源 , 即编码蛋 白激酶 ( P K ) 基 因所在. O R F 4似乎是 MD V独特的 , 但通过 与HS V - I g G比较 , 可 见两 者有 明显相似性 , 故认 为ORF4为 HS V ― l g G同 源基 因.编码 MDVs D的ORF5与 H S V g D基 因高度同源 , O R F 5可编码

3 9

8 个 氨基 酸残基组成 的 多肽 , 靠近ORF 5的Nf 端有一个疏水区,信号肽的切除在此进 行.在c,端也有 一个疏水区,具有跨膜 功能 .MDV g D中许多氨基 酸残基 (

6 0 ~2

6 0位置) 在哺乳 动物 c 卜 疱疹 病毒 中是保 守的,尤其是 7十半胱氨酸有 6个在同一处出现 , 表 明它 们有类似的三级结构 .MD V g D与HSV、 P RV和VZVzD总的相 似性分别 为43.8,d2.9和4l.编 码MD V g I 的ORF6仅作 了部分 测定,已明确编码其中

2 5

2 个 氨基 酸的序列 , 根据 P R V和HSVgI长度推算 , 估计已测序 部分 可 代表 MD V g I 靠近 N , 端的65~7

0 .与其它疱疹病毒 g I 序列 比较 , MD V s I 最保 守 区域位于 分子的 中部至 Nf 端r .编码 MDV感染细胞多肽'

( I C P ) 基因被定位于us区的 B a mHI - A 片段 , 编码区全长t245bp,G+c为52,预计 MD VI C P 蛋 白有其它疱疹 病毒 I C P 的相 似结构 , 该基 因已在鸡胚 成纤维细胞 ( C E F ) 中得到 成功表达r ] . 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 2期 罗满林 等89另外 , 编码 MD V属 共同抗原 P

9 蛋 白抗原的基 因定位于 B a mHI R 片段及 R片段两侧 的O和B片段[ … . 最近,一个与 MDV致瘤密切相关的基 因一me q 基 因定位于 m 区的 B a mHI 片段及与此 片段重叠的 E c o Q 片段 . 它包括一个编码

3 6

2 个氮基酸 的ORFmeq基 因对病毒 的潜伏状态有 控 制作用 , 除此之 外,它仅 存在于 MDV致瘤株 , 在肿瘤 细胞 中能持续高水平表达 , 尤 其是 它编 码的蛋 白质具有类似鸡的 l o s / j u n等核 内肿瘤基因产物的亮........