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产品中文说明书 OriCell Wistar大鼠脂肪间质干细胞 成软骨诱导分化培养基试剂盒 货号:RAWMD-90041 (200 mL) RAWMD-90042 (100 mL) CBPI0350A7 RAWMD-9004 Page

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5 产品描述 由Cyagen团队精心优化的OriCell Wistar大鼠脂肪间质干细胞成软骨诱导分化培养 基试剂盒,包括适合Wistar大鼠脂肪间质干细胞成软骨诱导分化的基础培养基和添加 物.

本产品可增强Wistar大鼠脂肪间质干细胞向成软骨方向诱导分化的能力. 本产品仅用于科研用途,不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途. 试剂盒组成成分

200 mL/Kit

100 mL/Kit Wistar Rat Adipose-derived Stem Cell Chondrogenic Differentiation Basal Medium Wistar 大鼠脂肪间质干细胞成软骨诱导分化基础培养基

194 mL

97 mL Dexamethasone 地塞米松

20 μL

10 μL Ascorbate 抗坏血酸

600 μL

300 μL ITS+Supplement ITS 添加物

2 mL

1 mL Sodium Pyruvate 丙酮酸钠

200 μL

100 μL Proline 脯氨酸

200 μL

100 μL TGF-β3

2 mL

1 mL 阿利辛蓝染液

10 mL

5 mL 使用说明 成软骨诱导分化完全培养基的配制 1. 用70%乙醇擦拭试剂盒中各瓶/管的开口外壁,室温放置数秒使酒精挥发. a) 地塞米松 b) 抗坏血酸 c) ITS添加物 CBPI0350A7 RAWMD-9004 Page

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5 d) 丙酮酸钠 e) 脯氨酸 f) Wistar大鼠脂肪间质干细胞成软骨诱导分化基础培养基 2. 超净工作台中将以上(a) ~(e)全部加入Wistar大鼠脂肪间质干细胞成软骨诱导分化 基础培养基 (f) 中,制备成软骨诱导分化完全培养基的预混液. 3. 无菌吸取少量成软骨诱导分化基础培养基洗涤各瓶/管,尽可能将所有组分完整地 加入基础培养基中,少量残留可能会影响产品性能. 4. 轻晃配制好的预混液,混合均匀之后即可使用. TGF-β3的稀释 1. 将TGF-β3 小量分装至耐低温储样管中,保存在-20℃或更低的温度下并于6个月之 内使用完毕.试剂过期请务必放弃使用. 注意:吸取 TGF-β3 之前需短暂离心(2400 g)试剂管,使试剂聚集于管底以便取用. 2. 按照比例(1 mL预混液中加入10 μL TGF-β3),吸取实验所需剂量的 TGF-β3, 加入相应体积的预混液中配制成软骨诱导分化完全培养基,轻轻地上下颠倒试剂 管以确保试剂混合均匀. 重要提示:配制好的成软骨诱导分化完全培养基必须在

12 小时之内使用. 成软骨诱导分化操作规程 1. 进行成软骨诱导分化实验之前,需要对常规消化后的细胞进行计数. 2. 将3-4*105 个细胞转移到15 mL离心管中,250 g离心4 min. 3. 吸去上清.加入0.5 mL预混液,重悬上一步离心所得沉淀,以清洗Wistar大鼠脂 肪间质干细胞,室温下150 g离心5 min. 4. 重复步骤3,再次清洗细胞. 5. 将上一步所得沉淀用0.5 mLWistar大鼠脂肪间质干细胞成软骨诱导分化完全培养 基重悬. 6. 室温下150 g离心5 min. 7. 拧松离心管盖以便于气体交换,将其放置于37℃,5% CO2的培养箱中培养. 注意:

1 此步骤不需要吸掉上清并重悬细胞.

2 24 小时之内不要摇动离心管. CBPI0350A7 RAWMD-9004 Page

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5 8. 当细胞团出现聚拢现象时(一般为24 h或48 h后,实际视细胞生长情况而定)轻 弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中. 9. 自接种开始计算,每隔2-3 d 给细胞换用新鲜的成软骨诱导分化完全培养基,每管 约0.5 mL成软骨诱导分化完全培养基. 注意:小心操作,不要吸出软骨球. 10. 换液之后,轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中.稍加拧松离心管盖 放入37℃,5% CO2的培养箱中继续诱导培养. 11. 一般持续诱导21-28天后,可对软骨球进行福尔马林固定和石蜡包埋切片,最后进 行阿利辛蓝染色. 阿利辛蓝染色分析 1. 软骨球经石蜡包埋后切片. 2. 染色步骤: a) 脱蜡和脱水;