PDF《中华人民共和国国家标准》

4 无菌操作将样品转至

500 mL 锥形瓶中,如使用均质袋,可直接进行培养,于36 ℃±1 ℃培养

8 h~ 18h. 如为冷冻产品,应在

45 ℃以下不超过

15 min,或2℃~5 ℃不超过

18 h 解冻. 5.2 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物,移取

1 mL,转种于

10 mL TTB 内,于42 ℃±1 ℃培养

18 h~24 h.同时,另取

1 mL,转种于

10 mL SC 内,于36 ℃±1 ℃培养

18 h~24 h. 5.3 分离 分别用接种环取增菌液

1 环,划线接种于一个 BS 琼脂平板和一个 XLD 琼脂平板(或HE 琼脂 平板或沙门氏菌属显色培养基平板) .于36 ℃±1 ℃分别培养

18 h~24 h (XLD 琼脂平板、HE 琼脂 平板、沙门氏菌属显色培养基平板) 或40 h~48 h (BS 琼脂平板) ,观察各个平板上生长的菌落, 各个平板上的菌落特征见表 1. 表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 沙门氏菌 BS 琼脂 菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色;

有些 菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变. HE 琼脂 蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色;

有些菌株为黄色,中心黑色或 几乎全黑色. XLD 琼脂 菌落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心,或 呈现全部黑色的菌落;

有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心. 沙门氏菌属显色培养基 按照显色培养基的说明进行判定. 5.4 生化试验 5.4.1 自选择性琼脂平板上分别挑取

2 个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线, 再于底层穿刺;

接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于36 ℃±1 ℃ 培养

18 h~24 h,必要时可延长至

48 h.在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内,沙门氏菌属 的反应结果见表 2. 表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果 三糖铁琼脂 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 赖氨酸脱羧酶试验培养基 K A 可疑沙门氏菌属 K A 可疑沙门氏菌属 A A 可疑沙门氏菌属 A A 非沙门氏菌 K K 非沙门氏菌 注:K:产碱,A:产酸;

+:阳性,-:阴性;

+(-) :多数阳性,少数阴性;

+/-:阳性或阴性. 5.4.2 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水 (供做靛基质试 验) 、尿素琼脂 (pH7.2) 、氰化钾 (KCN) 培养基,也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑 取可疑菌落接种.于36 ℃±1 ℃培养

18 h~24 h,必要时可延长至

48 h,按表

3 判定结果.将已挑菌 落的平板储存于

2 ℃~5 ℃或室温至少保留

24 h,以备必要时复查. GB 4789.4―2010

5 表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 反应序号 硫化氢 (H2S) 靛基质 pH 7.2 尿素 氰化钾 (KCN) 赖氨酸脱羧酶 A1 A2 A3 注:+阳性;

-阴性;

+/-阳性或阴性. 5.4.2.1 反应序号 A1:典型反应判定为沙门氏菌属.如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶

3 项中有

1 项异常,按表

4 可判定为沙门氏菌. 如有

2 项异常为非沙门氏菌. 表4沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 pH 7.2 尿素 氰化钾(KCN) 赖氨酸 脱羧酶 判定结果---甲型副伤寒沙门氏菌(要求血清学鉴定结果) - + + 沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ(要求符合本群生化特性) + - + 沙门氏菌个别变体(要求血清学鉴定结果) 注:+表示阳性;

+表示阴性. 5.4.2.2 反应序号 A2:补做甘露醇和山梨醇试验,沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳 性,但需要结合血清学鉴定结果进行判定. 5.4.2.3 反应序号 A3:补做 ONPG.ONPG 阴性为沙门氏菌,同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒 沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性. 5.4.2.4 必要时按表