PDF《株核型多角 体病毒的裂解 气相色谱分析》

病毒学杂 志成一株核型多角体病毒的 裂解气相色谱分析 朱湘 民汤显春 中国科学院 武汉病毒研究所 , 武汉 提要本文介 绍了茶毛虫、蓖麻蚕 、 棉铃虫、斜纹 夜蛾 、 黑 点银 纹夜蛾以 及美国白蛾 等种昆虫的 株 核型 多 角体 病毒 裂 解色谱 图的 绘 制方 法.

通过指纹图的分 析,可明显地 鉴别区分相同亚 群 的不 同毒株.株核型 多角体病 毒既有峰群的特异 性,亦有峰高比值的特异 性.指纹图分 析结果表明,它们是各不 相同的毒株 , 证明了裂解气 相 色谱 法分析鉴定核型多角体病 毒 的可 行性.以化学成分为分类 鉴定依据 的 裂解 气相色谱 法、王,简称 , 是 在气 相 色谱基 础 上发 展起来 的一种 先进 色谱技术 . 近 年来 , 它 的应 用研究领城 日益 扩大 , 不仅用于鉴 定微 生物〔' 一.〕,也用于分 析鉴别 化 学组 成和 结构 极为 复杂的生物 大分子〔'".大最研究业 已证 明,法绘制 的裂解 色谱 图亦称指纹图,用于上述生物 材料的鉴定、鉴别 和分析已少 艾为一种 灵敏、佳确 、 贡 现性高 的快速 方沮已「.通过 指纹图彼 此 问特 异性的分析 , 通 常可将 微 生物 鉴定 到属 、 种、亚种或血清型 , 亦可区分被 测生物 大分子在化学组成和结构 土的微小 差别.然而,对病毒 进行分析,迄今国内外 报道 甚少〔'"'〕 . 木 研究 对杆 状 病毒属 亚群 〔 ' " 种昆虫的株核型 多角体 病毒工," 、 ・ , 子 生行 了 裂解 气相 色 普鉴定分 析.材料与方法

一、供试核型多角体病毒 茶毛虫福建株 一,,

.简称 一茶毛虫四川株简称一茶毛虫恩施株简称一蓖麻蚕 , , 简称 棉铃虫武汉株 , 简称 一斜纹夜蛾 武汉 株 简称 一黑点银纹夜 蛾单粒包埋 简称感染了"的斜 纹夜蛾幼 虫获得的 多粒 包埋 型简称美国 白蛾 辽 宁株 简称一美国白蛾 陕西株 简称 本文 于工年月四日收 到 病毒 学杂志,一斜纹夜蛾 华师 株 简称 一.以上毒株均 由 中国菌种 保藏委员会普通 微生物病毒 中心 提供.

二、多角休病毒的 制备 与提 纯 按文 献〔" ' 方法 进行 , 制得的纯净多角体 悬浮于无 菌 的二 次 蒸馏 水,℃保存 , 供色谱分析 用.

三、裂解气相 色谱 分析 条件 本研究在 带有管 式炉裂,解器 和计算机 的一气相色谱 仪 上进行 . 裂解温 度稳定在℃,裂解 时间秒色谱柱 义 的盘旋 玻璃 柱,填充料 一 涂于 一目程序升温开始温度 ℃ , 保持 分钟 后,先以℃速率升 至℃,保持 分钟,再以℃速率升至 ℃ , 直至分析 完毕.氮气 流速 丫,氢气 , 空气.双氢火焰 离子化检测器,灵敏度 , 又,纸速,进样 口 温度 ℃ , 置、处,按上述 参数 编 好程序 . 然后用微量进样 器取提纯 的病 毒悬液川约相当 于干重病毒 户注入裂解 器 的铂 舟中,热风吹干分钟,进样 前,样品舟先在 裂解炉进 口 处停留 分钟 . 按 上述 步骤 , 每个样 品至少重复 分析 次.结果与讨论在核型 多角体病毒 制备 、 提 纯规 范化 和 色谱条件 恒定的条 件下 , 分析同一毒 株均 可图一的裂解色谱 图一病毒学 杂志、得到重复 稳定的指 纹图,从每 个毒 株样 品 的三张 重复指 纹图 中选 出一张 , 用 字母 标 出特 征峰 , 用保留时间 图 中打 印数 值,士分视为 同一 值,下同、峰高比 值〔一指纹图中,任意 二个不 同峰 的峰 高比值,与另一 指纹图 中相应 峰指标号 相 同的 色谱 峰 的峰 高比值〕,分析彼 此间的异同.在卜述条件下 , 株均可得到 一个色谱 峰,整个图谱均可 分 为六 组 峥群 , 但 各株指纹 图在 峰群 和峰高比值上是 各不 相同的.技其昆虫种类 并兼 顾指纹图特征,可将 绘制的指纹图 分为 五类.类一图和一图的指 纹图中,相应 峰有 相 同的 保留时间和 不 同峰 高比 值指纹图中不 同峰的 峰高比值和 毒株性质 有关 , 不取决于进样 量,图谱 峰形相似 . 第一 组的、、三个峰 高,依递增.第二 组的、、、四个峰中,都以峰最 高,峰最低 . 第三 组的、、、峰形 极 相似 . 第四组的、、三个峰 , 都以峰为最 高,峰最低.第五 组的、、和第六 组的、峰形也极 相近 . 但它们所有不 同峰 的峰 高 比值 是不甚相同的,尤其表 现在 值在一中为 , , 在一中为 值在一中为 , 在一,中为 . 指纹图分析结果表 明,一和一是二个有 许多相同点 的不 五一同毒 株.它们的用限制 性内切 酶 分析表 明,图谱中均 有许 多分子 量相同的谱带 存在,不同的是 一比一多出 条亚 克分 子带,且迁移 率不同.裂解 病毒学 杂志 , 色谱分析 结果 与酶 切图谱分析 结果 相一致 〔' 〕 . 一 的指 纹图图,就其整个 峰形、相应峰的保 留时 间、峰高比值 与一和一是完全不 同的.第一组的峰高于 峰,峰最低 . 第三组的峰远远 高于 其他 峰,明显 地不 同于 图和图.第五 组的、、峰形也与前二 张 指纹 图的 峰 形大不 相同,指纹 图分 析表明,一是与一和一完全不 同的另一个 分 离株 . 图一的裂解 色谱 图一,类图和图的指纹 图谱 极为 相似 . 第一组至第六 组的峰形特点 与 相同 , 但 两者 相应 峰、、、的保 留时 间是 各不 相同 的,其余相应 峰的保留时 间相同.、、峰高 相互 间的比值几乎 相等.只是几个 特征峰的峰高比值略 有不 同,在一指纹图中,,