PDF《问题分析指南》

FOREGENE Water DNA Isolation Kit Trouble Shooting ?Copyright Foregene 2014/03.

All rights reserved. 1/3 问题分析指南 以下针对水体样本基因组 DNA 提取中可能遇到的问题进行分析,希望能对您的实验 有所帮助.另外,对于在操作说明和问题分析以外的其他实验或技术上的问题,我们 设有专门的技术支持帮助您.如有任何需要可联系我们:028-66070618 或E-mali: [email protected]. 低产量或无 DNA 通常有多种因素会影响基因组 DNA 产量,包括样本来源、样本保存条件、样本的预 处理、操作等. 提取过程中无法获得基因组 DNA 1. 水体样品泥沙含量较大,但微生物含量较少,导致过滤过程中滤膜过早堵塞,膜 上微生物较少,无法获取基因组 DNA. 建议:如果样品中含有大量泥沙,建议将样品静置一段时间后,取上层液体进行 过滤. 2. 水体样品过滤体积过小或者是水体中微生物含量较少,可能导致提取不到相应的 基因组 DNA. 建议:对于微生物含量较少的水体样本品,应尽量增加过滤体积,如自来水应使 用2L 以上进行过滤,进行基因组 DNA 提取操作. 3. 试剂盒保存不当或存放时间太长,导致试剂盒里面某些组分失效. 建议:购置新的水体基因组 DNA 提取试剂盒进行相关操作. 4. Buffer WB 没有添加无水乙醇. 建议:确认 Buffer WB 中添加正确体积的无水乙醇. 5. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上. 建议:将65℃预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间,并在室温放置

5 分钟增加洗 脱效率. 提取获得低产量基因组 DNA 1. 水体样品泥沙含量较大,但微生物含量较少,导致过滤过程中滤膜过早堵塞,膜 上微生物较少,无法获取基因组 DNA. FOREGENE Water DNA Isolation Kit Trouble Shooting ?Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 2/3 建议:如果样品中含有大量泥沙,建议将样品静置一段时间后,取上层液体进行 过滤. 2. 水体样品过滤体积过小或者是水体中微生物含量较少,可能导致提取不到相应的 基因组 DNA. 建议:对于微生物含量较少的水体样本品,应尽量增加过滤体积,如自来水应使 用2L 以上进行过滤,进行基因组 DNA 提取操作. 3. 洗脱液问题. 建议:请使用 Buffer EB 进行洗脱;

如果使用 ddH2O 或其他洗脱液,确认洗脱液 的pH 值在 7-8.5 之间. 4. 洗脱液没有正确滴加. 建议:请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间,并在室温放置

5 分钟增加洗脱效率. 5. 洗脱液体积太少. 建议: 请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组 DNA 洗脱, 最少不要低于 50μl. 提取获得基因组 DNA 纯度低 基因组 DNA 纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想,如:酶切不开,PCR 得不 到目的基因片段等. 1. 滤膜没有剪碎,造成裂解不完全. 建议:在裂解之前,应严格按照说明书,将滤膜尽量剪碎.一般情况下,建议只 剪取 1/2 滤膜进行基因组 DNA 提取, 在微生物含量非常少的情况下可使用整张滤 膜进行基因组 DNA 提取. 2. 杂蛋白污染、RNA 污染. 分析:没有使用 Buffer PW 洗涤纯化柱;

Buffer PW 洗涤纯化柱没有使用正确的 离心转速. 建议:在上清液过柱时尽量保证上清液中无沉淀;

务必按说明书进行 Buffer PW 洗涤纯化柱,并且此步骤不能省略. 3. 杂质离子污染. 分析:省略了 Buffer WB 洗涤纯化柱或者只洗涤了一次,导致残留的离子污染. 建议:务必按说明书使用 Buffer WB 洗涤

2 次,以尽量去除残留的离子. 4. RNA 酶污染. 分析:Buffer 中添加了外源的 RNA 酶;