PDF《禽 白血病病 毒 J亚群 内蒙株 的分离 与鉴 定》

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9 8年于美 国骨髓性 白血病 肉鸡病例分离 的AD OL毒株隶属于相同的一个亚群 . 最近荷兰对

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9 1年分离的 A L V 毒株进行 了回顾性鉴定,结果 表明荷兰

9 0年代初所分离的 A L V亦属于这个新的 亚群 .已有 的骨髓性 白血病病例 的报道显示,J亚群ALV己存在于欧洲 E 洲 、中美洲 、南美洲 扣j 、 中东I

6 和澳大利亚 】 ,在世界范围内广泛传播 . 我国

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9 9年后于内蒙古 】 、 山东、江苏【

9 和宁夏 等地发现骨髓性 白血病 肉鸡病例,并于

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9 9年从 江苏和 山东的正常商 品肉鸡和 肉种鸡 ML病例 中分 离到 J亚群 A L V. 本研 究是在

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9 9年赵振华等对 肉鸡骨髓性 白 血病病理学研究 '

m 】 的基础上 ,追踪发病的某 肉种 鸡场进行病毒分离与鉴定工作 ,同时对 山东采集的 一例肉种鸡 ML病例亦进行 了病毒分离 .

1 材料和 方法

1 .

1 样品收稿日期 :2

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3 .

0 2 一I1,修 【 口J日期 :2

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3 .

0 4 ―

2 8 作者 简介 :杨玉 莹(1962一),男,天 津 ,研 究员 , 博士 ,主 要研 究方 向 为动物 病毒学及 病理 学.E - ma i l : y a n g ~ v u y i n g@s o h u . c o r n l j … H T ― I ~ I [ + I ― . + '

- - - - r d 维普资讯 http://www.cqvip.com 杨 玉莹 ,等.禽 白血病病毒 J亚群 内蒙株 的分离与鉴 定455随机选 取 曾见典 型ML病例【8】的内蒙 古某 肉种 鸡场 淘汰肉种 鸡(76周 龄)1 0只(编号为100119―10208)采血致死 ,取肝 、肾上腺组织作为病毒分 离样 品,并取肝 、脾 、肾、股骨髓 、骨骼肌 、心肌 、 脑组织、胰腺、十二指肠作病理学观察 .分离的血 清进行 J 亚群 E L I S A抗体检测 ( I DE XX禽 白血病 J 亚群抗体检测试剂盒 ) .来 自肉种鸡 (

7 0周龄 )ML 病例肝组织 的病毒分离样品 ( 编号为 S )于2000年采 自山东 .

1 .

2 细胞 和单抗DFl细胞系1

1 和抗 AL V _ J单克隆抗体 J E

9 1 】 由扬州大学秦爱建教授提供 . l -

3 病毒分离 将1.1中的样 品研磨 、 过滤除菌后分别接种 D F. 细胞 ,每隔

5 ―

7 d传代一次.1

5 d后将每种样 品接种 的DF1 细胞部分传至

9 6孔板用于病毒抗原 的间接 免疫荧光检测 ,部分收获后提取 DF . 细胞基 因组 DNA作为 P C R反应的模板 .

1 .

4 间接 免疫 荧光反应 传至

9 6孔板中的 DF l 细胞培养维持

7 d后按文 献I J 进行间接免疫荧光反应 .F I T C 标记的羊抗 鼠IgG购 自上海生工.

1 .

5 模板 D NA制备及 P C R 样 品接种 的DFl细胞参照文献【 】 进行 DNA提取,用 于扩增分离毒株前病毒 DNA.P C R 采用两 对AL v _ J 特异性引物 . 第一对引物为 AD OL I

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1 设计, 位于p o l 基因终止密码上游和长未端重复序列 的3 末端 ,进行 P C R ........