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1 ~1 .

1 . Y e b等I 川、Wu 和You等I t

4 ] X i e 和Hu 等I 也分别在我国台湾省、 夏威夷报道: B B T V的基因组为多组分的 l ~1 .

1 k b左右的环状 s s - D N A.和BBTV澳大利亚分离株的 6个DNA组 分一样. D NA序列上都有一个预示病毒粒子基因组分方向的颈环结构. 在 已报道测序的澳大利亚分离物的 6个DN A组分 、 夏威夷 分离物 的 3个 DN A组分、 台 湾分离物的 3个DN A组分中, 基因组 D NA的正链 上以及互补链上都存在有 数量不等 、 大小不同的开放读框( Op t .r e a d i n gf r a me .O R F) .在这些 OR F s中, 夏威夷分离物 的DNA―l 、 澳 大利亚分离物的 D N A一1 以及台湾分离物的 D N A一 2上分别存在有一个编码复制酶的基因, 编码的酶 蛋 白分 子量 分别为33.5kD、

3 3 .

6 k D和32.777kD【

4 '

1 1 ,

1 4 ] o

3 香蕉柬顶病毒检测技术 由于 B B TV只侵染香蕉植物的韧皮都组 织, 病 毒含 量极低【

4 J , 故 建立 灵敏度高 的检测技 术 显得 十分重要.迄今已用过DAS-ELISA、 免疫吸附电镜(Immt m t y ~r b e n t e he t r o n mi ― c r o s c o p y , I S E M) 、 同位素标记和非同位素标记的 D o t . b l o t 和Southemblot以及 P C R等技术进 行检 澍[

2 ~

5 ・ t

5 ~ m l .

1 9

9 0至1992年 间, T h o ma s 、 Wu和su、孙茂林等先后分 别制备了多克隆抗血清 和Mc Ab , 并成功地应用于 B B T V的检测中_

2 '

1 5 ,

1 .T h o ma s 将制备的多克隆抗体作 为包 被抗体和酶结 合物 , 借助 DA S - E LI S A 检 测病 株.均呈阳性 反应;

而不 与感染CMV 的病 株发 生反 应,并证明病蕉叶片中抹组织 中的病毒含 量高于 叶片的叶肉【

2 1 . 当用 多克隆抗体 或抗 台湾分离物 的Mc Ab(

2 H6 .

3 D1

2 ) 分别作为包被抗 体和酶结 合物 , 或是两种包被抗体 和酶结合物 交叉使用, 所检测的病株都为阳性反应, 键株都呈 阴性反应.将Mc Ab

2 H6 、

3 D1 2应用于 I S E M 中来检 测部分纯化 的病 毒制剂 , 见到大量的 B B T V粒体 ;

用多克隆抗体作包被抗体 , Mc A b

3 D1 2作为 酶结合物时, 用DA S - E LI S A检测到病 株汁液的稀释度达 l :

1 2

8 f

2 l . Ha r d i n g 等首次将得到的克隆 p B T

3 3 8用2P标记, 制备成探针, 应用 D o t . b l o t 杂交法来进 行检测.从病 蕉中得到的病毒提 取物 、 核 酸提取物 以及从纯化的 B B T V 中提取的核酸, 均与 这一探针发生特异性很强的杂交反应, 而不与从 鲑株中提取的核酸 以及受 C MV侵染的香蕉 植株 中提取的棱酸发生杂交反应【

3 J . 其后,Xie和 Hu比较 了ELISA、 D o t . b l o t 杂交 法以及PCR法 检测 B B TV 的灵敏度 和 适用 维普资讯 http://www.cqvip.com

1 o

0 中国病毒学第12卷 性,l6_.结果表明: 当包被抗体和酶标记 的抗体均 为来 自台湾的 Mc A b

2 H

6 、 而测定样品均为 病叶中脓时, 如用 DA S - E L I S A法检测, 则被检汁液的稀释度可达到

1 :

2 5 0, 相当于

0 .

4 r a g蕉 叶组织中的病毒含量 ;

当DN A探针用地高辛( D i g o x l g a z ~ f i n , DI G) 标记 , 测定样品同样为叶片中 脉时, 如用 S o u t h e r n b l o t 以及 D o t ― b 】 O t 法.检测 的灵敏度均达 到0.4mg ;

但 揉针 D NA用PdCTP标记时, 用同样方法检测相同样品, 灵敏度可达到

0 .

0 8 mg ;

用PCR法检测时, 病株汁液 释稀度可达到