PDF《IgG Beads 4FF》

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3 常州天地人和生物科技有限公司 IgG Beads 4FF 目录 1.

产品介绍…1 2. 纯化流程…1 3. 问题及解决方案…2 4. 订购信息及相关产品…3 1. 产品介绍 IgG Beads 4FF 是以人 IgG 为亲和配体,一步纯化原核表达系统产生的蛋白 A 融合产品. Protein A 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白,主要通过 Fc 片段结合哺乳动物 IgG.IgG Beads 4FF 是以高度交联的 4%琼脂糖凝胶为基质,可以在相对较高的流速下进 行纯化.具体性能见表 1. 表1. IgG Beads 4FF 产品性能 指标 性能 基质 高度交联的 4%琼脂糖微球 配体 人IgG 载量 >2mg 蛋白 A/ml 介质 粒径 (μm) 45-165 最大耐压 0.3 MPa,

3 bar 储存缓冲液 含20% 乙醇的 1XPBS 储存温度 2°C - 8°C 2.纯化流程 2.1 Buffer 的准备 所用水和 Buffer 在使用之前建议用 0.22μm 或0.45 μm 滤膜过滤. 结合/ 洗杂液: 50mM Tris,0.15M NaCl,0.05%Tween-20, pH7.6 洗脱液: 0.5M HAc,pH3.0 或0.1M 甘氨酸,pH 3.0 中和液:1M Tris-HCl,pH8.5 2.2 样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值, 可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、 腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析. 样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率 和防止堵塞柱子. 2.3 IgG Beads 4FF 装填 IgG Beads 4FF 被广泛应用于工业纯化,因此,涉及到各种中低压色谱层析柱的填装,下 面介绍使用 IgG Beads 4FF 填装层析柱的方法.

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3 常州天地人和生物科技有限公司 层析柱的装填(使用储液器装填) 1) 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱 底部留出 1-2cm 的去离子水. 2) 将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中.用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减 少气泡的产生. 3) 如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面, 连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡. 4) 打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行.最初应让缓冲液缓慢流过层 析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱 床形成的不均匀.如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用泵的最大流速,这样 也可以得到一个很好的装填效果. (注意:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流 速的 75%)当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上

3 倍柱床体积的去离子 水.标上柱床高度. 5) 关闭泵,关闭层析柱出口. 6) 如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中. 7) 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处.允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头. 8) 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡.如果需要可以重新调整分配器. 2.4 样品纯化 1) 将IgG Beads 4FF 装入合适的层析柱,层析用

5 倍柱体积的结合液进行平衡,使填料 处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用. 2) 将样品加到平衡好的 IgG Beads 4FF 中(保证目的蛋白与 IgG Beads 4FF 充分接触, 提高目的蛋白的回收率) ,收集流出液. 3. 用10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液. 4. 使用 5-10 倍柱体积的洗脱液,收集洗脱液,即目的蛋白组分. 5. 依次使用

3 倍柱体积的结合液和