PDF《科学院 武缸病》

4 8小时后 , 冲洗 x光腔片,

6 D N A 的斑 点杂 交取A蛐NPV- -D NA・ A r ― ― 甜帆 t B mN F V - -I ] ~A. 及ADNA各1坤分别点 于Nc膜上 . 宦然干 燥后按瞌B杂交法 直接 与At 日MPV--D ~ A探 针杂 交和放 射 自显髟 . 结果l病毒核酸 的紫外吸收 芦) s 一苯酚法直接从多角 体提取的棱醴, 经紫外分光光度计检澳 J 都具有典型韵紫外吸收 图】^∞NPV―DNA和 A * N P V ~ I } N A紫外线 吸收1 I 臼线№・1UVacumof^NP v '

嘣AandA*NPV―DN A A : Ar NP D N A B : Ar N PV― D NA 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 3期 严镀钫等 : 两株蓖库蚕棱型参角俸病毒 D NA同薄性的研究

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9 曲线 , 吸 收高峰 在258rim, 低峰在

2 3

0 a m. '

A r ~ . NP V- D NA的OD2

6 0 / O D2

8 0 ~1 .

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A r N P V― D N A O D

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1 7 9.

1 ( 尉1),甩此病 毒接酸 不经酶 藓溜1%琼脂 糖凝胶 电泳 获得均 一带,表明此病毒 核酸 不舍宿主 核酸 .

2 A r s c s N P V - D NA和Ar NP V - D N A酶解 图谱 一一如图

2、3所示 , A r s c sNP v_ D NA 和ArNPV― r i g a经EcoRI 酶氍后分别 产生 5和 8个 片段 , 经BamH I 酶解 的两株 N P V― D N A各获得 5十和 7个片段 .虽然带谱不甚相同 , 但其 中有部分 片段分子量相 同 使用 DN A Hi n d Ⅲ酶解 片段作分 子量标准经计算 A r NP V ― DN A平 均分子量 为77.2*1

0 ( 表1).而 A r s c s NP V ― DN A平均分子量为

5 5 .

4 2 *1

0 ( 表1).这说 明两株 NP V ― DN A酶 图谱不相同外 , 其核酸分子量也有差异 . A X D N A - t - H i n d_ 作分子量太小的标志 A, 妇ma r k e ~ A 蝴NPVDNA C Ar N P V D N A 田2两株 N P VD N A的E∞RI 酶解带谱 』 - 哺・2Pattc~lutofE.oRI雌_枷蛳l胛boftwoNPV- DN A A . ? , D N A +H ~ d - 作 分子 量大 小的标 志A.Bmarkcl-~B.^NPV DNA+ E c o RI + B a mHI C ^】 V― D N A D ^ NP V ― D NA 图 两株 D N ^的H亩mHl酶解带谱 l l F 培.

3 P a t t e m~o f ] ~mH1 d ∞t 坤n f 怕g , n J r t w o N P V DNA '

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2 6 O 中国病毒学第8卷衰l^喇・ N P vD N A A r M. v ^酶孵片段5 量Tp b.1 Mdc c u l a rwdE d Ar s c s NPV―DN^ a n dArNPV- -Df q A f r a g m~t s ^. Ar s c s ~ P v ONA n Ar NPV DNA 圈4[p]卯标记的 E c a R ) - A r s c s N F V D N A探 针与 A r N ] P V D N A - -E e o R I 片段杂交结果 F I B -4 Hyb r i d i z a t i o n a n s t y ~ sd '

P l a b ~ l ~l E ad RI - - Ar 帕,NP V NDA p r o b e wn h Ar NPV ONA ― B∞ 且lf r a g n ~ms A . ^ 舟aN PV O NA H ^r NPV DNA 图5P标 记的ArscsNPVDNA撵针与ArNFVDi~IA的 m H

1 蔫謦 片段 的杂 交F5Hyb r l d l z a t i on a n a l y s ~ s '

P i a b e l c d B amHI - - Ar .

3 ∞ ND v DNA p r o b e wi t h Ar NPV DNA ― B a m H l f r a g m e n t s 维普资讯 http://www.cqvip.com 第3期严银钫等 : 两株蓖麻蚕桉型多角体痫毒 D N A同源性的研究

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1 3 DN A的片段杂交 结果 : A r s c s N P V D N A和ArNPVDNA与[ P ] d c T P标记 的ArscsNPVDNA探针 杂交 , 结果 A r s c s NP V - D N A 的 5个 片段全 部杂交 , 而ArNF%'

一DN A 的 8个片段 中只有 5个 片段 能与探针 杂交 . 这 5个 片段的分子 量均 与ArscsNPV-DNA的 5个片段分子 量相 同( 图4).其余 3个片段 与Arsc-sNPV- -D N A 的EcoKl酶解 片段无相同核苷酸序列 , 所 以未 能杂交上 . 而[ p]dCI'

P标记 的ArscsNPV―DNA探 针与 A r N P V D N A的BarnHl酶解 片段 杂交 时,ArNPV-DNA的

7 个 片段 中有