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3 μg/ml for3h) ? AKT抑制剂AKT-i (420 nM for 30min) ? GLUT4抑制剂indinavir (100 μM for 30min) 分别测定L-6细胞的葡萄糖摄取能力 GLUT4途径显著受到抑制.说明ADP-1可能是通过GLUT4途径促进葡萄糖摄取 Research Design and Result 5. ADP-1对APPL介导的AMPK信号通路的影响 ADP-1是否可以像脂联素一样激活依 赖于appl1的AMPK通路,而促进葡萄 糖摄取呢? ADP-1孵育L-6细胞3h后,提取总蛋白. (二甲双胍和未处理的细胞分别为阳 性和阴性对照) 测定脂联素信号通路相关标记蛋白的表达. (p-AMPK、APPL

1、GLUT

4、ACC) Research Design and Result ADP-1可以通过激活APPL1介导的AMPK信号通路促进葡萄糖摄取和脂肪酸代谢. Research Design and Result 6. ADP-1对GLUT4mRNA的表达的影响 为了进一步了解ADP-1诱导的 葡萄糖转运(GLUT4). L-6细胞培养4-6天后,ADP-1处理3h.(二甲双胍和未处理的细 胞分别为阳性和阴性对照) GLUT4mRNA的检测 ADP-1可以促进GLUT4mRNA的表达. Research Design and Result ADP-1促进了葡萄糖转运是 否与GLUT4的易位有关? 用SDS-PAGE Western Blot对ADP-1 处理后的细胞膜和细胞质中GLUT4 检测.(二甲双胍和未处理的细胞 分别为阳性和阴性对照) 7. ADP-1可以促进GLUT4在L-6细胞中的易位 细胞膜上 细胞质中 Research Design and Result AS160的磷酸化水平 TBC1D的磷酸化水平 这两种蛋白的磷酸化可以促进GLUT4的转位和葡萄糖转运. ADP-1促进GLUT4mRNA的表达,进而促进葡萄萄糖转运. Research Design and Result 8. ADP-1对L-6 细胞中APPL1和Rab5相互作用的影响 在脂联素诱导的细胞葡萄糖摄取中,Rab5和APPL1之间的相互作用起关键作用. 为了验证ADP-1对L-6 细胞中 APPL1和Rab5相互作用的影响 对APPL和Ra5b进行免疫共沉淀 Western blot 验证 结果表明, ADP-1可刺激 L-6细胞中 APPL1和Ra5b 的相互作用. APPL1处理L-6细胞3h Research Design and Result 9. ADP-1对p38MAPK的磷酸化和细胞核中PPAR-α 激活的影响 AMPK的激活是否可以导致,p38MAPK的磷酸化和细胞核中PPAR-α 的激活? ADP-1和Compound C 分别处理L-6细胞 Western blot 检测p- p38和PPAR-α的含量 ADP-1 诱导的AMPK的激活,在p38MAPK的磷酸化和细 胞核PPAR-α 的激活中起重要作用. Research Design and Result 10. ADP-1对脂肪细胞的分化和脂质积累的影响 脂肪细胞可以在MDI培养基中形成脂滴, 为了研究ADP-1是否影响脂滴的形成. 将ADP-1和罗格列酮(rosiglitazone)分 别添加到MDI 培养基中,对3T3-L1 孵育 ADP-1可以诱导3T3-L1细胞的脂肪生成 油红染色,并用显微镜观察 Research Design and Result 11. ADP-1对原代骨骼肌细胞代谢的影响 为了验证是否ADP-1对小鼠原代骨 骼肌细胞代谢具有同样的作用. 用ADP-1和metformin 分别孵 育原代骨骼肌细胞. Western blot检测GLUT4和p-AMPK的表达 ADP-1也可以影响体外原代骨骼肌细胞代谢. Research Design and Result ADP-1(30 mg/kg)或metformin(

50 mg/kg )每隔 一天注射一次,连续20天db/db小鼠的ADP-1的体内注射 注射1st, 5th, 10th, 15th and 20thd收 集血清 ELISA检测血清胰岛素水平 ADP-1(30 mg/kg)或metformin(

50 mg/kg )每隔 一天注射一次,连续30天 口服葡萄糖耐量 每隔30min检测一次血清葡萄糖 水平,直到120min Research Design and Result 10.在体内,ADP-1对db/db小鼠糖耐量的影响 关于公司

03 conclusion conclusion ?本研究从脂联素胶原结构域鉴定出了具有13个残基的ADP-1,并具有 显著的代谢功能. ?ADP-1在体外和体内具有显著降糖能力,表明其具有显著的抗糖尿病 治疗潜力,本研究可以帮助设计具有有益代谢作用的肽. LOGO 汇报时间:2018年5月26日 汇报人:赵文丽 敬请大家批评指正! END